纖溶酶原激活物抑制因子-1對肝星狀細(xì)胞活化及其細(xì)胞外基質(zhì)的影響.pdf

1、研究目的：肝纖維化已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人類健康的疾患，肝星狀細(xì)胞活化是肝纖維化的中心環(huán)節(jié)，而肝纖維化形成關(guān)鍵是基質(zhì)的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor-β1,TGFβ1）已知是促進(jìn)肝纖維化最強(qiáng)的細(xì)胞因子，它可促進(jìn)肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell,HSC）活化和增殖,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生。HSC通過產(chǎn)生細(xì)胞因子影響著肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。有研究表明HSC可表達(dá)纖溶酶原激活物抑制因子-

2、1（plasminogen activator inhibitor type-1,PAI-1），參與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展，TGFβ1可促進(jìn)HSC PAI-1的表達(dá)。外源性PAI-1能否影響肝星狀細(xì)胞TGFβ1表達(dá)，以及細(xì)胞外基質(zhì)的合成目前尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)肝星狀細(xì)胞，研究外源性PAI-1對肝星狀細(xì)胞活化及細(xì)胞外基質(zhì)的影響。
　　 研究方法:人肝星狀細(xì)胞LX-2貼壁細(xì)胞培養(yǎng)；MTT法測定PAI-1對LX-2細(xì)胞的最佳干預(yù)濃

3、度；采用ELISA法測定細(xì)胞上清液中透明質(zhì)酸（hyaluronic acid,HA）、TGFβ1、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1）；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測ɑ-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin,ɑ-SMA）、基質(zhì)金屬蛋白酶-2（matrixmetallo proteinase-2，MMP-2）、TIMP-1、PAI-1、尿激酶型

4、纖溶酶原激活物（urokinase plasminogen activator, uPA）蛋白表達(dá)；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription ploymerase chain reaction, RT-PCR)檢測TGFβ1及PAI-1mRNA的表達(dá)，并分析兩者相關(guān)關(guān)系。
　　 結(jié) 果：1、PAI-1對LX-2細(xì)胞增殖刺激作用明顯，且PAI-1濃度為10ng/ml時(shí)刺激作用最為明顯，A492為1.636±0

5、.315（F=11.697, p<0.01)。
　　 2、ɑ-SMA在LX-2胞漿中表達(dá)，核內(nèi)無明顯表達(dá)。PAI-1干預(yù)12h組蛋白表達(dá)量為（0.408±0.031）較對照組（0.301±0.015）增加明顯（t=5.438, p<0.01）。
　　 3、MMP-2、TIMP-1、 PAI-1、uPA在LX-2胞漿中表達(dá)，核內(nèi)無明顯表達(dá)。PAI-1干預(yù)12h組MMP-2蛋白表達(dá)量為（0.245±0.028）較對照組（0.

6、233±0.041）僅輕微增加（t=0.473, P>0.05)；uPA 12h組為（0.303±0.052）較對照組（0.288±0.036）增加不明顯（t=0.581, P>0.05）；PAI-112h組為（0.331±0.045）較對照組（0.205±0.007）增加顯著（t=4.857，P<0.01）；TIMP-112h組為（0.412±0.031）較對照組（0.235±0.011）增加顯著（t=9.511,P<0.01）。

7、r>　　 4、PAI-1干預(yù)12h后TGFβ1mRNA、PAI-1mRNA分別為（1.839±0.405），（2.325±0.970），對照組分別為（1.090±0.123），（0.790±0.156），兩者相比差異顯著。且TGFβ1mRNA與PAI-1mRNA呈正相關(guān)（r=0.827，P<0.05）。
　　 5、在細(xì)胞上清液中加入PAI-112h，24h，48h后（刺激組）TGFβ1蛋白表達(dá)量分別為（8.854±3.168）

8、、（44.348±8.415）、（225.819±12.797）pg/ml，對照組為（0.855±0.744）pg/ml，干預(yù)組較陰性對照組增加顯著(F=1566.752，P<0.01)；HA分別為（2.577±0.801）、（18.177±7.141）、（50.473±4.903）ng/ml，對照組（0.450±0.154）ng/ml，干預(yù)組較陰性對照組增加顯著（F=235.632，P<0.01)；TIMP-1分別為（2.872±1.