IL-2和IL-12基因多態(tài)性與HBV宮內(nèi)感染易感性的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatnisBvirus，HBV)感染是全球性的公共衛(wèi)生問題。我國(guó)是HBV感染的高發(fā)區(qū)，約30％～50％緣于母嬰傳播(宮內(nèi)及圍產(chǎn)期感染)。HBV宮內(nèi)感染者長(zhǎng)期處于免疫耐受，約90％慢性化，對(duì)抗病毒藥物療效差，是肝硬化、肝細(xì)胞肝癌的高危因素，因此就我國(guó)國(guó)情而言對(duì)HBV母嬰傳播阻斷的研究顯得非常重要。HBV宮內(nèi)感染免疫的發(fā)生主要是在HBV感染早期機(jī)體對(duì)HBV的清除力不夠，其中Thl類細(xì)胞因子對(duì)于病毒的清除有重要作用，IL一

2、2及IL～12是Tbl類細(xì)胞因子的代表，而且本課題組的前期研究已發(fā)現(xiàn)HBV宮內(nèi)感染兒童外周血白細(xì)胞IL-2及IL-12水平降低，提示二者可能與HBV宮內(nèi)感染有關(guān)。IL-12是異源二聚體細(xì)胞因子，其中p35mRNA(IL-12A)為構(gòu)建性表達(dá)，p40mRNA(IL-]2B)為調(diào)節(jié)性表達(dá)，故IL-12B對(duì)IL-12蛋白的表達(dá)量的影響意義更大。 隨著基因組醫(yī)學(xué)研究的深入，遺傳背景(基因多態(tài)性)對(duì)人類非遺傳性疾病的發(fā)生、發(fā)展的影響日益受

3、到重視。雖然一個(gè)基因內(nèi)存在多個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)，但實(shí)際上對(duì)不同SNP位點(diǎn)進(jìn)行整體研究，即由這些不同SNP構(gòu)成的單倍型，更利于發(fā)現(xiàn)基因與疾病或某種表型的相關(guān)性。 本課題的研究目的是研究IL-2基因一330位點(diǎn)SNP、IL-12B基因3’'tJTR區(qū)+1188位點(diǎn)SNP、G／-(G堿基缺失)多態(tài)性、啟動(dòng)子區(qū)4bpinsert(兒-12Bpro)多態(tài)性及ATT(8／9)多態(tài)性與HBV宮內(nèi)感染易感性的關(guān)系，并進(jìn)行IL-12B

4、基因多態(tài)性位點(diǎn)單倍型構(gòu)建與分析，探討高危兒童發(fā)生宮內(nèi)HBV感染的易感因素，探討IL-2與IL-12對(duì)我國(guó)高危兒童發(fā)生HBV宮內(nèi)感染的影響的疊加或協(xié)同作用。 實(shí)驗(yàn)對(duì)象與方法 母親為HBV攜帶(HBsAg和／或HBeAg陽(yáng)性，或HBVDNA陽(yáng)性)所生新生兒，出生后按程序進(jìn)行主被動(dòng)聯(lián)合免疫，出生時(shí)外周靜脈血HBsAg和／或HBVDNA陽(yáng)性并持續(xù)6個(gè)月以上者為宮內(nèi)感染組(I組)，出生時(shí)及后期隨訪中未出現(xiàn)過(guò)HBsAg和／或HBVD

5、NA陽(yáng)性，并1歲時(shí)HBsAb達(dá)保護(hù)滴度(>10mIU／L)者為宮內(nèi)未感染組(II組)，另選正常健康兒童作為正常對(duì)照。提取外周血基因組DNA，PCR擴(kuò)增目的片段后進(jìn)行測(cè)序或毛細(xì)管電泳法檢測(cè)各組對(duì)象IL-2和IL一12B基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型。運(yùn)用PHASE軟件對(duì)IL-12B基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行單倍型構(gòu)建與分析，SPSS11.5軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)及精確檢驗(yàn)，檢測(cè)各位點(diǎn)基因型、等位基因、IL-12B各單倍型在Ⅰ組、Ⅱ組和對(duì)照組問的頻率分布差異及I

6、L-2與IL-12B各位點(diǎn)基因型組合在Ⅰ組和ⅡI組間的分布頻率差異。 結(jié)果 IL-2基因及IL-12B基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型在三組對(duì)象中的分布符合Hardy-Weinberg平衡；宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)感染組在性別、母親HBV標(biāo)志物及產(chǎn)前注射HBIG情況方面均不具有顯著性差異。 Ⅰ組IL-2基因-330位點(diǎn)從、AC、CC基因型分布頻率分別為32.4％、56.8％、10.8％，Ⅱ組為51.3％、38.2％、10.5％，正

7、常對(duì)照組分別為54.8％，38.1％，7．1％。Ⅰ組與Ⅱ組IL-2-330三種基因型分布頻率比較x2=6.237，p=0.044；兩組間AA基因型和非AA基因型(包括AC和CC)之間頻率分布差異顯著(p=0.019)，0RAA=0.455(95％CI，0.234～0.883)；ORAC=2.132(95％CI，1.107～4.645)。三組中IL-2-330位點(diǎn)等位基因頻率分布分別為A64.3％、72.3％和73.8％，C35.7％、2

8、7.7％和26.2％，I組與II組等位基因頻率比較x2=6.560，p=0.010；與對(duì)照組比較，頻率分布差異有顯著性，p=0.045；ORA=0.65(95％CI，0.404～1.054)：ORc=1.53(95％CI，O.948～2.476)。 Ⅰ組IL-12B基因+1188位點(diǎn)AA、AC、CC基因型分布頻率分別為25.7％、44.3％、30.O％，H組三種基因型分布頻率為36.6％、47.9％、15.5％，正常對(duì)照組三種基

9、因型的分布頻率分別為48．8％，39.0％，12.2％。比較Ⅰ組與Ⅱ組問CC基因型和非CC基因型(包括AC和AA)之間頻率分布x2=17.078，p

10、0Rc=1.673(95％CI，1.043～2.684)。 I組中以4bp缺失純合基因型(IL-12Bpr02．2，CG／CG)為主，占49．6％，而在¨組和正常對(duì)照組中則分別為29．3％和27．9％：相反，在后兩組中以雜合子(IL—12Bpr01．2，CTCTAA／CG)所占比例相對(duì)較高。比較三組間三種基因型分布頻率差異發(fā)現(xiàn)：I組與¨組間χ2=7.223，p=0.027，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而II組與對(duì)照組問差異無(wú)顯著性(χ2=

11、1．473，p=0．479)；I組與II組問IL一12Bpr02．2基因型和非IL一12Bpr02．2基因型之間頻率分布差異有顯著性χ2=6．286，p=0．012，0R2.2=2．346(95％CI，1．198～4．595)；0R1.2=0．450(95％CI，0．230～0．881)。I組與II組間等位基因頻率分布差異不具有顯著性χ2=3.519，p=0.061。 G／一多態(tài)性及ATT(s／9)多態(tài)性的基因型及等位基因分布頻

12、率在I組與II組間無(wú)顯著差異。 +1188位點(diǎn)A／C多態(tài)性與4bp插入多態(tài)性進(jìn)行單倍型構(gòu)建后A／CTCTAA單倍型在I組中占19.29％，明顯低于H組(31.43％)，兩組頻率分布具有顯著性差異(p=0.028)，ORA／CTCTAA=0．521(95％CI，0.300～0.904)；IL-12B四個(gè)位點(diǎn)組成的單倍型“-／A／CTCTAA／ATT9”在兩組間頻率分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.065)，但在宮內(nèi)感染組占15.11％

13、，明顯低于宮內(nèi)未感染組(24.24％)；其它單倍型組間頻率分布均無(wú)顯著差異(p>O.10)。G／一多態(tài)性與+1188位點(diǎn)C／G單倍型和A／一單倍型頻率顯著高于A／G和C／一單倍型(<10％)，但兩組間的各單倍型頻率分布并沒有顯著差異。 IL-2基因-330位點(diǎn)與IL-12B+1188位點(diǎn)AA／AA基因型組合在I組占4.92％，而在II組則占20.63％，兩組間頻率分布差異具有顯著性(p：0.015)，0R=0.198；而AC／C

14、C基因型組合在兩組中的比例分別為21.31％和4．72％，差異具有顯著性(p=O.007)，0R：5.417。IL-2基因一330位點(diǎn)與IL-12B基因G／一多態(tài)性AA／(-／-)基因型組合在兩組中的比例分別為4.69％、17.65％，兩組間頻率分布差異具有顯著性(p=0.026)，0R=0.229；而AC／GG組合在兩組中的比例分別為18.75％和2.94％，差異具有顯著性(p=0.004)，0R=7.647。IL-2基因-330位點(diǎn)

15、與IL-12Bpro多態(tài)性的AA／(CTCTAA／CTCTAA)的基因型組合在兩組中的比例分別為1.56％和13.24％，兩組問頻率分布差異具有顯著性p=O．018，0R=0.104；而AC／(CG／CG)基因型組合在兩組中的比例分別為26.56％和11.76％，差異具有顯著性(p=O.030)，0R=2.738。其他基因型組合在兩組的分布則無(wú)顯著差別。 結(jié)論 IL-2-330(A／C)位點(diǎn)SNP與HBV宮內(nèi)感染易感性有

16、關(guān)。其中A等位基因及從基因型在II組明顯占優(yōu)勢(shì)，提示A等位基因及從基因型對(duì)攜帶HBV母親所生的高危兒童發(fā)生HBV宮內(nèi)感染有一定的保護(hù)作用，而攜帶AC基因型的高危兒童則容易發(fā)生HBV宮內(nèi)感染。 IL-12B+1188位點(diǎn)A／C多態(tài)性和ILl2Bpro多態(tài)性與HBV宮內(nèi)感染易感性有關(guān)：+1188位點(diǎn)CC基因型及C等位基因攜帶高危兒童易發(fā)生HBV宮內(nèi)感染，而A等位基因?qū)y帶HBV母親所生的高危兒章發(fā)生HBV宮內(nèi)感染有一定的保護(hù)作用；兒

17、12Bpr02．2基因型(CG／CG)是高危兒章發(fā)生HBV宮內(nèi)感染的易感基因型，ILl2Bpr01．2基因型(CTCTAA／CG)對(duì)高危兒童發(fā)生HBV宮內(nèi)感染有一定保護(hù)作用。兒一12B基因G／一及ATT(s／,多態(tài)性位點(diǎn)與HBV宮內(nèi)感染易感性無(wú)關(guān)。 IL-12B基因+1188(A／C)位點(diǎn)多態(tài)性及ILl2Bpro多態(tài)性組成的單倍型與HBV宮內(nèi)感染易感性有關(guān)，其中A／CTCTAA單倍型對(duì)HBV宮內(nèi)感染具有一定的保護(hù)作用，其他位點(diǎn)的