淫羊藿總黃酮延緩秀麗線蟲衰老的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[背景]中國已經(jīng)跨入老齡化社會(huì)。衰老以及衰老相關(guān)疾病成為日趨嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)問題和社會(huì)難題。闡明衰老機(jī)制、干預(yù)衰老進(jìn)程具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。中醫(yī)藥學(xué)對(duì)于延緩衰老有著深刻的理論闡述和豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),其中“補(bǔ)腎延緩衰老”占主要地位。本課題組在腎虛證研究的過程中,已經(jīng)揭示淫羊藿總黃酮(EF)是補(bǔ)腎方及單味中藥淫羊藿延緩衰老的主要藥效成分。為評(píng)價(jià)EF延緩衰老的效果并探索其作用機(jī)制,引進(jìn)國際上衰老研究領(lǐng)域的主要模式生物秀麗線蟲(Caenorhabditi

2、s elegans,C.elegans)進(jìn)行研究。秀麗線蟲生命周期短,可重復(fù)大樣本壽命實(shí)驗(yàn),并且與其壽命相關(guān)的遺傳和環(huán)境背景較清晰,非常適合進(jìn)行衰老干預(yù)效果的評(píng)價(jià)和機(jī)制研究。在秀麗線蟲上進(jìn)行的壽命分析實(shí)驗(yàn)、生殖能力測(cè)試和壓力應(yīng)激測(cè)試所得之指標(biāo)可構(gòu)成簡(jiǎn)單的藥物干預(yù)衰老評(píng)價(jià)系統(tǒng),并可對(duì)藥物作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。
　　 [目的]通過秀麗線蟲評(píng)價(jià)EF延緩衰老的作用并初步探討EF作用機(jī)制。
　　 [方法]
　　 1.藥物濃

3、度-效果檢測(cè):動(dòng)物分為EF0mg/L(正常對(duì)照組)、25mg/L、50mg/L、100mg/L,組進(jìn)行壽命實(shí)驗(yàn)以選出EF作用的有效劑量。
　　 2.壽命分析實(shí)驗(yàn):動(dòng)物分為正常對(duì)照組、CR組(陽性對(duì)照)、EF最佳劑量組(以下簡(jiǎn)稱EF組)進(jìn)行壽命實(shí)驗(yàn),并對(duì)正常對(duì)照組及EF組的生存曲線進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析,評(píng)價(jià)EF延長線蟲壽命的效果。
　　 3.生殖能力測(cè)試:動(dòng)物分為正常對(duì)照組及EF組,進(jìn)行生殖能力測(cè)試,檢測(cè)EF是否在延長線蟲壽命的

4、同時(shí)影響其生殖能力。
　　 4.壓力應(yīng)激實(shí)驗(yàn):動(dòng)物分為正常對(duì)照組及EF組,進(jìn)行急性熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)、急性氧化應(yīng)激實(shí)驗(yàn),佐證壽命實(shí)驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)EF是否通過提高線蟲壓力應(yīng)激能力延長線蟲壽命。
　　 [結(jié)果]
　　 1.EF濃度-效果檢測(cè):①平均壽命(單位天):0mg/L組20.48±5.52(n=50),25mg/L組23.73±4.75(n=52),50mg/L組29.04±6.39(n=56),100mg/L組22.55

5、±4.49(n=58)。②最大壽命(單位天):0mg/L組30.8±1.1(n=5),25mg/L組32±2(n=5),50mg/L組41.67±2.9(n=6),100mg/L組30.7±1(n=6)。25mg/L、50mg/L、100mg/L組的平均壽命均長于正常組,以50mg/L組最為顯著；僅50mg/L組的最大壽命長于正常組。
　　 2.壽命分析實(shí)驗(yàn):①平均壽命(單位天):正常對(duì)照組20.48±5.52(n=50),CR

6、組26.52±5.08(n=50),EF組29.04±6.39(n=56)。②最大壽命(單位天):正常對(duì)照組30.8±1.1(n=5),CR組36±2(n=5),EF組41.67±2.9(n=6)。EF組的平均壽命和最大壽命均長于CR組。對(duì)正常組及EF組的生存曲線進(jìn)行動(dòng)力分析顯示,EF能推遲線蟲進(jìn)入死亡期,降低年齡特異死亡率。
　　 3.生殖能力測(cè)試:①產(chǎn)卵總數(shù):正常對(duì)照組211.9±38.73(n=10),EF組198.8±4

7、2.5(n=13),兩組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②生殖峰期(性成熟后第2和第3天)產(chǎn)卵數(shù):正常對(duì)照組120±23.24(n=10),EF組149±22.67(n=13),EF組產(chǎn)卵數(shù)量多于正常組。
　　 4.壓力應(yīng)激實(shí)驗(yàn):①急性熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)中線蟲平均生存時(shí)間(單位小時(shí)):正常對(duì)照組6.71±1.3(n=19),EF組8.93±1.6(n=21),EF組存活時(shí)間長于正常組。②急性氧化應(yīng)激實(shí)驗(yàn)中線蟲平均生存時(shí)間(單位小時(shí)):正常對(duì)照組6.9