黃芪與當(dāng)歸對(duì)骨髓干細(xì)胞移植治療糖尿病缺血下肢血管再生的干預(yù)作用.pdf

1、目的：研究黃芪、當(dāng)歸及其組方對(duì)體外培養(yǎng)骨髓干細(xì)胞(bonemarrowstemcells，BMSC)增殖的影響及其對(duì)BMSC移植治療糖尿病缺血下肢后血管再生的影響，并探討其可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 1．選擇5只雄性200～220gSD大鼠高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周后，給予鏈脲佐菌素(STZ)按30mg/kg腹腔內(nèi)注射二次誘發(fā)2型糖尿病，1周后檢測(cè)空腹血糖≥16.7mmol/L為2型糖尿病造模成功。密度梯度法分離5只大鼠骨

2、髓干細(xì)胞，分為空白對(duì)照組、黃芪組、當(dāng)歸組、黃芪當(dāng)歸組。各組細(xì)胞培養(yǎng)14d后，采用MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液VEGF蛋白濃度，Western-Blot檢測(cè)骨髓干細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)。
　　 2．依上述同樣方法制備2型糖尿病大鼠模型。使用3％的水合氯醛腹腔麻醉，結(jié)扎左側(cè)股動(dòng)脈及其分支，制成糖尿病大鼠下肢缺血模型，所有大鼠采用胰島素控制血糖。制模成功后將其隨機(jī)分成6組，每組8只。包括空白對(duì)照組、正常對(duì)照組、糖

3、尿病對(duì)照組、黃芪組、當(dāng)歸組和黃芪當(dāng)歸組。BMSC移植方法為在大腿內(nèi)側(cè)和外側(cè)等距離各注射3個(gè)位點(diǎn)，劑量為每位點(diǎn)0.1mL細(xì)胞懸液，移植術(shù)后繼續(xù)飼養(yǎng)4周進(jìn)行指標(biāo)觀察。用激光多普勒血流儀檢測(cè)左、右后肢同部位局部皮膚的血流灌注量，堿性磷酸酶染色法檢測(cè)微血管密度(microvasculardensity，MVD)，Western-Blot法檢測(cè)肌肉組織的VEGF蛋白表達(dá)量。
　　 結(jié)果：
　　 1．黃芪、當(dāng)歸及二者合用對(duì)體外培養(yǎng)大

4、鼠骨髓干細(xì)胞增殖的影響如下：
　　 (1)BMSC的增殖活性：與空白對(duì)照組(0.119±0.034)比較，黃芪組(0.253±0.086)和黃芪當(dāng)歸組(0.337±0.070)的骨髓干細(xì)胞增殖水平明顯增高(分別為P＜0.05和P＜0.01)，且黃芪當(dāng)歸組的以上作用較黃芪組明顯增強(qiáng)(P＜0.01)。
　　 (2)細(xì)胞培養(yǎng)上清液VEGF蛋白濃度：與空白對(duì)照組(314.08±100.90)比較，黃芪組(466.01±94.40

5、)和黃芪當(dāng)歸組(589.93±116.81)的上清液VEGF蛋白濃度明顯增高(分別為P＜0.05和P＜0.01)，且黃芪當(dāng)歸組的以上作用較黃芪組明顯增強(qiáng)（P＜0.05）。
　　 (3)BMSC的VEGF蛋白表達(dá)水平：與空白對(duì)照組[(50.67±14.51)％]比較，黃芪組[(79.67±20.57)％]和黃芪當(dāng)歸組[(104.17±20.51)％]的骨髓干細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)水平均明顯增高(分別為P＜0.05和P＜0.01)，且

6、黃芪當(dāng)歸組的以上作用較黃芪組明顯增強(qiáng)（P＜0.05）。
　　 2．?dāng)U增后的骨髓干細(xì)胞移植入缺血下肢后對(duì)血管再生的影響如下：
　　 (1)血流灌注量：空白對(duì)照組為(10.06±6.28)％，正常對(duì)照組為(90.27±7.09)％，糖尿病對(duì)照組為(31.98±18.63)％，黃芪組為(55.13±25.12)％，當(dāng)歸組為(35.19±18.75)％，黃芪當(dāng)歸組為(73.12±12.32)％。正常對(duì)照組、黃芪組及黃芪當(dāng)歸合用組

7、的血流值明顯高于其他3組(P＜0.05或P＜0.01)，且正常對(duì)照組、黃芪當(dāng)歸合用組均較黃芪組明顯增高，黃芪當(dāng)歸合用組低于正常對(duì)照組(P＜0.05或P＜0.01)。糖尿病對(duì)照組和當(dāng)歸組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但均高于空白對(duì)照組(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 (2)微血管密度：空白對(duì)照組為(0.55±0.25)，正常對(duì)照組為(3.71±1.09)，糖尿病對(duì)照組為(1.45±0.44)，黃芪組為(2.30±0.5

8、4)，當(dāng)歸組為(1.47±0.55)，黃芪當(dāng)歸組為(3.01±0.50)。正常對(duì)照組、黃芪組及黃芪當(dāng)歸合用組的微血管密度明顯高于其他3組(P＜0.05或P＜0.01)，且正常對(duì)照組和黃芪當(dāng)歸合用組比黃芪組的微血管密度明顯增加，黃芪當(dāng)歸合用組低于正常對(duì)照組(P＜0.05或P＜0.01)。糖尿病對(duì)照組與當(dāng)歸組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但與空白對(duì)照組比較，微血管密度均明顯增加(P＜0.05)。
　　 (3)VEGF蛋白表達(dá)量：

9、正常對(duì)照組和黃芪當(dāng)歸合用組VEGF蛋白表達(dá)明顯較黃芪組、糖尿病對(duì)照組和當(dāng)歸組增強(qiáng)（P＜0.05或P＜0.01)。正常對(duì)照組高于黃芪當(dāng)歸合用組（P＜0.01）。黃芪組VEGF蛋白表達(dá)明顯高于糖尿病對(duì)照組和當(dāng)歸組（P＜0.05）。糖尿病對(duì)照組與當(dāng)歸組比較，VEGF表達(dá)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。與空白對(duì)照組比較，其他各組VEGF蛋白表達(dá)均明顯增加(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1．單用黃芪或其與當(dāng)歸合