中國漢族人群甘露糖結合凝集素基因多態(tài)與結核病易感性的相關分析及其機制研究.pdf

1、背景:結核病(Tuberculosis,TB)是長期危害人類健康的嚴重疾病之一。近年來,由于HIV和結核分枝桿菌雙重感染,以及耐藥型結核分枝桿菌的流行,導致結核病的發(fā)病率和死亡率大幅度上升。全球大約已有三分之一人口感染了結核分枝桿菌,但僅有十分之一的感染者會進一步發(fā)展為臨床結核病,這提示宿主的遺傳因素與結核病易感性有關。潛伏結核病與活動性結核病是感染結核后分別處于不發(fā)病狀態(tài)和發(fā)病狀態(tài)的兩大人群,以此為對象研究兩組人群之間的遺傳差異具有一

2、定價值。甘露糖結合凝集素(mannose-bindinglectin,MBL),是一種鈣離子依賴的(C型)血清凝集素,在防御抵抗多種病原微生物的天然免疫中起著重要的作用。在結核感染后不同疾病狀況的人群中研究MBL的基因遺傳差異、外周表達差異以及發(fā)生機制對于揭開結核病發(fā)病機制中的遺傳因素具有一定意義。
　　 目的:利用酶聯免疫斑點法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)技術篩選結核潛伏感染

3、人群,將其與活動性結核病患者作為結核遺傳易感性的研究對象,研究中國漢族人群甘露糖結合凝集素(Mannose-bindinglectin,MBL)基因多態(tài)性的差異及其與結核發(fā)病的相關分析和潛在機制。
　　 方法:(1)采用T-SPOTTB試劑盒對287例結核患者的長期密切接觸者進行結核潛伏感染人群的篩選。(2)采用多元連接酶檢測反應等位基因精確分型法(AMLR)對MBL基因的6個SNP位點(L/H位點、Y/X位點、P/Q位點、A/

4、D位點、A/B位點、A/C位點)進行基因分型,其中活動性結核人群(TB組,n=449例)、結核潛伏感染人群(LTB組,n=125例)、健康人群(HC組,n=249例)。(3)采用ELISA方法檢測血漿中MBL蛋白表達水平(TB組,n=139例;LTB組,n=124例;HC組,n=155例)。(4)采用統(tǒng)計學方法分析TB組、LTB組、HC組三組人群中MBL基因多態(tài)性與結核病發(fā)病的相關性。(5)采用雙熒光素酶報告基因方法,在NIH3T3細胞

5、中,檢測MBL基因不同單倍型的啟動活性。
　　 結果:(1)ELISPOT技術從287例結核患者的長期密切接觸者中篩選到結核潛伏感染者125例,檢測陽性率為43.6％(125/287);
　　 (2)攜帶-550GG基因型的HC組與TB組比較,OR=0.70,95％CI=0.47-1.04,P值為0.075,提示基因型GG對結核的發(fā)生有保護作用的趨勢;
　　 (3)按性別分層,在-550位,GG基因型在TB組和H

6、C組之間的男性中有顯著性差異,OR=0.42,95％CI=0.20-0.86,P值為0.019,提示在男性中GG基因型對結核的發(fā)生有明顯的保護作用。在女性中,外顯子1區(qū)的54(B)位點基因型在三組不同人群中顯示有顯著性差異,P=0.039;
　　 (4)啟動子區(qū)-550位C/G(L/H)和外顯子1區(qū)的54(B)G/A(A/B)兩個位點都與MBL水平有相關性,P值＜0.001;
　　 (5)15種不同單倍型組合的MBL蛋白

7、水平具有顯著性差異,P值＜0.001;
　　 (6)ELISA方法檢測血漿MBL蛋白水平發(fā)現,活動性結核組MBL水平最高,健康人群MBL水平次之,而結核潛伏人群最低,三組人群之間MBL蛋白水平具有顯著性差異(P值＜0.001),說明低水平的MBL與機體抵抗結核病相關;
　　 (7)雙熒光素酶報告基因分析顯示,MBL基因不同單倍型的啟動活性大小依次為:pGL3-basic-HYP＞pGL3-basic-LYP＞pGL3-b

8、asic-LYQ＞pGL3-basie-LXP;這正印證了ELISA的結果:HYPA/HYPA對應的MBL水平最高,LXPA/LXPA對應的MBL水平最低,也就是說,在MBL結構基因的54位SNP位點基因型為野生純合子AA時,體現出啟動子區(qū)不同的單倍型對基因表達產物的調控作用強弱也不同。
　　 (8)在健康對照人群和結核潛伏感染人群之間未發(fā)現MBL基因多態(tài)性分布的差異。
　　 結論:中國漢族人群MBL基因多態(tài)性及血漿MB