BrMC對(duì)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞系干樣細(xì)胞特性的影響.pdf

1、目的:研究8-溴-7-甲氧基白楊素(8-bromo-7-methoxychrysin，BrMC)對(duì)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞極化表型以及肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)人肝細(xì)胞癌SMMC-7721細(xì)胞系細(xì)胞自我更新、干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)、遷移和侵襲等特性的影響，并探討B(tài)rMC調(diào)節(jié)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞NF-κB表達(dá)與其逆轉(zhuǎn)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞極化表型和抑制肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞系肝癌干樣細(xì)胞特性之間的關(guān)聯(lián)性。
　　方法:SMMC-7721細(xì)胞系第

2、3代球形成細(xì)胞鑒定作為肝癌干樣細(xì)胞(liver cancerstem-like cells，LCSLCs)模型，并收集LCSLCs條件培養(yǎng)基(LCSLC-CM)。以佛波酯(Phorbol Myristate Acetate，PMA)活化的體外培養(yǎng)人THP-1單核細(xì)胞系細(xì)胞為THP-1源性巨噬細(xì)胞，用LCSLC-CM處理的THP-1源性巨噬細(xì)胞作為肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞或者在Ttranswell小室與LCSLCs共培養(yǎng)系統(tǒng)中活化THP-1源性巨

3、噬細(xì)胞為肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞。LPS與INF-γ處理THP-1源性巨噬細(xì)胞作為經(jīng)典活化M1型巨噬細(xì)胞對(duì)照。不同濃度BrMC(0、5、10、20μmol/L)處理LCSLCs或LCSLCs/THP-1源性巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)觀察藥物干預(yù)效應(yīng)。NF-κB特異性抑制劑SN50用于探討B(tài)rMC藥理作用機(jī)制。比較腫瘤球形成率測(cè)定細(xì)胞自我更新能力，Western blot分析干細(xì)胞標(biāo)志物CD133和CD44蛋白的表達(dá)，劃痕法和Transwell小室侵襲試

4、驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力。細(xì)胞免疫熒光染色和Western-blot分析巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD68和M2型巨噬細(xì)胞即肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD163表達(dá)。ELISA測(cè)定肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基細(xì)胞因子IL-10、IL-12、VEGF、MMP-9濃度;Griess法測(cè)定培養(yǎng)基NO水平。
　　結(jié)果:1.與親本細(xì)胞相比，第3代人肝細(xì)胞癌SMMC-7721細(xì)胞系球形成細(xì)胞高表達(dá)CD133和CD44干細(xì)胞標(biāo)志蛋白，更高腫瘤球形成率

5、，具有肝癌干樣細(xì)胞特性。
　　2.LCSLC-CM或與肝癌干樣細(xì)胞共培養(yǎng)能有效誘導(dǎo)體外培養(yǎng)THP-1源巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞。與M1型巨噬細(xì)胞相比，肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞高表達(dá)CD163蛋白;細(xì)胞分泌譜為IL-10high、IL-12low、VEGF high、MMP-9 high;且NO釋放減少，呈現(xiàn)出M2型巨噬細(xì)胞極化表型。
　　3.肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細(xì)胞/THP-1源巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基有效誘

6、導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞自我更新、干細(xì)胞標(biāo)志蛋白表達(dá)、體外細(xì)胞遷移和侵襲。
　　4.BrMC以濃度依賴方式降低肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞CD163表達(dá)，逆轉(zhuǎn)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞M2型巨噬細(xì)胞極化相關(guān)細(xì)胞因子分泌譜。
　　5.BrMC以濃度依賴方式抑制肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞CD133和CD44蛋白表達(dá)，腫瘤球形成和體外細(xì)胞遷移和侵襲作用(P＜0.05)。
　　6.特異性NF-κB抑制劑SN50以濃度依賴方

7、式降低肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞NF-κB(p65)蛋白表達(dá)水平(P＜0.05）;同時(shí)，SN50與BrMC協(xié)同拮抗肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細(xì)胞/THP-1源巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞自我更新、干細(xì)胞標(biāo)志蛋白表達(dá)、體外細(xì)胞遷移和侵襲作用。
　　結(jié)論:1.肝癌干樣細(xì)胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣細(xì)胞/THP-1源性巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)促成THP-1源性巨噬細(xì)胞M2型極化。
　　2.肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基或肝癌干樣

8、細(xì)胞/THP-1源性巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞系細(xì)胞自我更新、干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)、遷移與侵襲等肝癌干樣細(xì)胞特性。
　　3.BrMC具有逆轉(zhuǎn)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞M2極化表型作用。
　　4.BrMC具有抑制肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞肝癌干樣細(xì)胞特性作用。
　　5.BrMC逆轉(zhuǎn)肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞M2極化表型和抑制肝癌相關(guān)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞系干樣細(xì)胞特性作用機(jī)制涉及其下調(diào)肝癌相關(guān)