低氧刺激對前軟骨干細胞分化的影響及機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分:前軟骨干細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
　　目的：
　　從SD大鼠乳鼠骺板分離純化得到前軟骨干細胞。
　　方法：
　　1.分離獲得SD大鼠乳鼠股骨和脛腓骨干骺端骺板處軟骨細胞，并應用免疫磁珠分選系統(tǒng)純化得到前軟骨干細胞，利用免疫熒光進行FGFR-3表型鑒定。
　　2.對前軟骨干細胞進行阿利新藍染色。
　　結(jié)果：
　　1.分離純化的前軟骨干細胞形態(tài)均一

2、，呈梭形或三角形。免疫熒光FGFR-3表型陽性。
　　2.前軟骨干細胞所形成的軟骨團塊阿利新藍染色陽性。
　　結(jié)論：
　　本實驗利用免疫磁珠分選系統(tǒng)成功獲得前軟骨干細胞。
　　第二部分:物理性低氧及化學性低氧對前軟骨干細胞分化的影響
　　目的：
　　研究低氧刺激對前軟骨干細胞分化的影響。
　　方法：
　　1.1％氧濃度刺激前軟骨干細胞不同的時間以后檢測 HIF-1α、SOX9、COL-II

3、、AGG mRNA表達量的變化及 HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG、ALP蛋白水平表達量的變化。
　　2.1%氧濃度刺激前軟骨干細胞后予以常氧條件下培養(yǎng)檢測 HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG、ALP蛋白水平表達量變化。
　　3.不同濃度氯化鈷刺激前軟骨干細胞后檢測HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG mRNA表達量的變化及HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG、ALP蛋白水平表達量的變化

4、。
　　結(jié)果：
　　1.1%氧濃度刺激前軟骨干細胞一定時間后 HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG mRNA表達量均升高。HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG蛋白水平表達量升高，而 ALP蛋白表達量變化不明顯。
　　2.常氧環(huán)境下調(diào)由低氧刺激引起的HIF-1α、SOX9、COL-II和AGG蛋白水平表達量的升高。而ALP蛋白水平表達量并沒有顯著改變。
　　3.一定濃度的氯化鈷刺激前軟骨干細胞后 H

5、IF-1α、SOX9、COL-II、AGG mRNA表達量升高，并且HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG蛋白水平表達量也有所升高，而ALP蛋白表達量變化不明顯。
　　結(jié)論：
　　低氧能促進前軟骨干細胞成軟骨分化。
　　第三部分:物理性低氧及化學性低氧對前軟骨干細胞YAP表達量的影響
　　目的：
　　研究低氧刺激前軟骨干細胞后YAP表達量的變化。
　　方法：
　　1.1%氧濃度刺激前軟骨干

6、細胞不同時間后檢測YAP mRNA及蛋白水平表達量的變化。
　　2.1%氧濃度刺激前軟骨干細胞后予以常氧條件下培養(yǎng)，檢測YAP蛋白水平表達量的變化。
　　3.不同濃度的氯化鈷刺激前軟骨干細胞后檢測YAP mRNA及蛋白水平表達量變化。
　　結(jié)果：
　　1.1%氧濃度刺激前軟骨干細胞一定時間后YAP mRNA及蛋白水平表達量升高。
　　2.常氧環(huán)境下調(diào)由低氧刺激引起的前軟骨干細胞YAP蛋白表達量的升高。