七葉樹屬植物資源及品質(zhì)研究.pdf

1、七葉樹屬(Aesculus Linn.)為無患子目七葉樹科（Hippocastanaceae）落葉喬木，主要分布在亞洲、歐洲、美洲，約有30余種，我國有10余種。該屬植物在產(chǎn)地民間多做理氣藥使用，其中中華七葉樹(Aesculuschinensis Bunge var.chinensis)、浙江七葉樹(Aesculus chinensis Bungevar.chekiangensis)和天師栗（Aesculus wilsonii Rehd

2、）的干燥成熟種子是中國藥典收載的常用中藥材“娑羅子”，具有疏肝、理氣、和胃、止痛、殺蟲之功效?，F(xiàn)代醫(yī)理研究表明，娑羅子在抗腫瘤、抗腦水腫、治療高血壓腦出血、冠心病、美尼爾氏病、老年支氣管哮喘、面神經(jīng)炎等方面具有確切療效。目前，已開發(fā)出七葉皂苷鈉凍干粉針劑、七葉皂苷鈉搽劑、復(fù)方七葉皂苷鈉凝膠、七葉皂苷鈉片等劑型，產(chǎn)品規(guī)模達(dá)到20億元。目前，娑羅子藥材資源以野生為主，而隨著人們對娑羅子藥用價(jià)值的認(rèn)識加深，對其資源需求也日益增加，導(dǎo)致野生資源

3、遭到極大的破壞，其產(chǎn)量呈下滑趨勢，且野生產(chǎn)量不穩(wěn)定，有大小年之分，不能夠滿足市場需求，娑羅子的采購價(jià)格一再攀升;此外商品藥材出現(xiàn)品種混雜、品質(zhì)不一的問題，給娑羅子藥材的安全、合理應(yīng)用帶來極大的風(fēng)險(xiǎn)。
　　 在系統(tǒng)查閱了國內(nèi)外七葉樹屬植物特別是娑羅子基源植物的資源、化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用及產(chǎn)業(yè)開發(fā)等研究文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，我們發(fā)現(xiàn)涉及該屬植物的資源及品質(zhì)的相關(guān)研究很少，尚無系統(tǒng)研究七葉樹屬植物資源分布、資源的合理利用與開發(fā)以及對藥

4、材品質(zhì)的有效控制方法等。因此，本論文對七葉樹屬植物重點(diǎn)是娑羅子基源植物的資源現(xiàn)狀、產(chǎn)地適宜性及栽培適宜區(qū)域規(guī)劃、DNA條形碼物種鑒定、化學(xué)品質(zhì)比較及指紋特征研究等方面進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，以其為該大品種藥物的藥材資源可持續(xù)發(fā)展及品種的有效控制提供科學(xué)依據(jù)。
　　 采用文獻(xiàn)調(diào)查結(jié)合實(shí)地考察的方法首次對中國境內(nèi)七葉樹資源種類、分布概況、適生生境、資源現(xiàn)狀進(jìn)行考察和分析，初步確定中國境內(nèi)分布的七葉樹分布范圍約在緯度21°32′N～39°5

5、5′N，經(jīng)度103°11′E～120°12′E，海拔50 m～1776 m，適宜溫暖氣候，及深厚、肥沃、濕潤而排水良好的土壤。由于野生七葉樹資源由于無節(jié)制的砍伐和天氣干旱，破壞十分嚴(yán)重，數(shù)量極少，規(guī)范化種植和系統(tǒng)化研究勢在必行。
　　 綜合實(shí)地采樣、標(biāo)本查閱和文獻(xiàn)研究結(jié)果，應(yīng)用中藥材產(chǎn)地適宜性分析平臺(TCMGIS-Ⅱ)對娑羅子三種基原物種的生態(tài)適宜區(qū)域進(jìn)行分析，確定七葉樹生態(tài)相似度95％～100％的區(qū)域主要分布于山東、陜西、河

6、北等15個(gè)?。ㄊ校?44個(gè)縣（市），總適宜面積為407692.4km2，其中以山東適宜面積和占縣（市）比例最大（適宜面積為108209.1 km2，占縣（市）比例77.4％，下同），其次為陜西(85064.8 km2，47.2％)、河北(42529.4km2，44％);天師栗生態(tài)相似度95％～100％的區(qū)域主要分布于貴州、四川、湖北等12個(gè)?。ㄊ校?50個(gè)縣（市），總適宜面積為251765km2，其中貴州適宜面積最大(55980km2，

7、28.4％);浙江七葉樹生態(tài)相似度95％～100％的區(qū)域主要分布于浙江、湖南、安徽等9個(gè)?。ㄊ校?47個(gè)縣（市），總適宜面積為67569.5 km2，其中以浙江適宜面積最大(22395.4 km2，23％)，為娑羅子資源的可持續(xù)利用、引種栽培及科學(xué)區(qū)劃提供了科學(xué)依據(jù)。
　　 通過考察七葉樹屬10個(gè)物種42份樣品的ITS，ITS2，psbA-trnH，rbcL，matK序列的PCR擴(kuò)增和測序效率、種內(nèi)及種間變異、鑒定效率后，對初篩

8、后的序列進(jìn)行barcoding gap檢驗(yàn)及NJ樹聚類分析，psbA-trnH序列作為鑒定七葉樹屬藥用植物的條形碼序列，其PCR擴(kuò)增和測序效率均為100％，種間最小變異大于其種內(nèi)最大變異，且鑒定效率為候選序列中最高，其barcoding gap檢驗(yàn)結(jié)果表明該序列在種間、種內(nèi)變異重合比例較小，且NJ樹聚類分析結(jié)果也表明psbA-trnH序列能夠提供充分的辨析效果，為七葉樹屬藥用植物快速準(zhǔn)確鑒別提供一種新的方法。
　　 應(yīng)用HPLC

9、法建立不同品種的娑羅子藥材中七葉皂苷A、七葉皂苷B兩個(gè)指標(biāo)成分的含量測定方法，通過紫外-可見分光光度法測定七葉皂苷的含量，并考察樣品中的水分，總灰分等含量，比較七葉樹屬主要資源種類娑羅子藥材化學(xué)品質(zhì)，不同品種娑羅子藥材中七葉皂苷A、七葉皂苷B的種類和含量各不相同，結(jié)合總七葉皂苷含量及水分、總灰分等常規(guī)理化實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目測定結(jié)果，不同品種的娑羅子藥材化學(xué)品質(zhì)差異較大，為不同品種的娑羅子藥材綜合質(zhì)量評價(jià)體系的建立提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　

10、 同時(shí)，通過對不同產(chǎn)地的七葉樹屬植物藥材進(jìn)行化學(xué)成分分析，建立評價(jià)娑羅子藥材質(zhì)量的液相色譜指紋圖譜分析方法。采用AgilentZORBAX SB-C18色譜柱，以乙腈-0.2％磷酸溶液為流動相梯度洗脫，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為220nm，對湖北、陜西、浙江、云南采集的36批七葉樹植物藥材進(jìn)行指紋圖譜分析，建立了36批不同產(chǎn)地七葉樹屬植物藥材的化學(xué)成分指紋圖譜，并為其質(zhì)量評價(jià)提供可靠依據(jù)。
　　 為進(jìn)一步利用藥材

11、資源，本文還以娑羅子油收率為評價(jià)指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)法，研究從娑羅子中提取娑羅子油的超臨界CO2最優(yōu)萃取工藝并采用GC-MS對娑羅子油成分進(jìn)行成分分析。采取萃取釜壓力28Mpa和釜溫度38℃、分離Ⅰ釜壓力12 Mpa和溫度40℃、分離Ⅱ釜壓力5Mpa和溫度40℃以及萃取時(shí)間110min時(shí)工藝條件最佳，娑羅子油平均收率為1.264％。對娑羅子油進(jìn)行了GC-MS分析，共鑒定了26種化合物，主要是脂肪酸成分。與石油醚法相比，超臨界CO2萃取