費(fèi)氏中華根瘤菌WGF03中硫代謝相關(guān)基因pdxP的研究.pdf

1、硫是生物體內(nèi)必不可少的大量生命元素之一，它不僅在氨基酸，蛋白質(zhì)和脂類的合成及功能形成上發(fā)揮重要作用，還參與生物體內(nèi)許多輔酶的合成作用。對(duì)根瘤菌而言，其對(duì)宿主的專一性正是由根瘤菌結(jié)瘤因子還原性末端的硫化修飾所決定的。
　　 在硫酸鹽同化途徑中，由硫化物(S2-)與O-乙酰絲氨酸(OAS)催化合成的半胱氨酸(Cys)所需的O-乙酰絲氨酸-（巰基）-裂解酶(OASTL)屬于5’-磷酸吡哆醛(PLP)依賴型酶家族，而pdxP編碼的是5’

2、-磷酸吡哆醇磷酸酶，它的作用是專一性的催化5’-磷酸吡哆醇(PNP)和5’-磷酸吡哆醛(PLP)脫磷酸變?yōu)檫炼叽己瓦炼呷Ｍㄟ^對(duì)苜蓿根瘤菌的研究發(fā)現(xiàn)PdxP很可能是調(diào)節(jié)生物體內(nèi)PNP和PLP含量的限制性酶。
　　 本實(shí)驗(yàn)首先利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)座子（pTnMod-RKm’）隨機(jī)插入到構(gòu)建了費(fèi)氏中華根瘤菌WGF03基因組中，構(gòu)建了5000個(gè)突變體，然后通過對(duì)不同硫源利用的選擇性篩選，得到了20個(gè)與硫代謝相關(guān)突變體，之后通過基因測(cè)序和生物信息

3、學(xué)分析，獲得了一段基因序列與Sinorhizobium meliloti中編碼pyridoxine 5-phosphate phosphatase的pdxP gene在核苷酸水平上有87％的一致性，在氨基酸水平上有88％的相似性。
　　 本實(shí)驗(yàn)利用自殺質(zhì)粒pK18mob，運(yùn)用同源單交換的方法構(gòu)建了費(fèi)氏中華根瘤菌WGF03pdxP的非極性突變體WTA和極性突變體WTB。通過測(cè)定突變體利用不同硫源的情況，發(fā)現(xiàn)突變體在以硫酸鹽，亞硫酸