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文檔簡介
1、目的:
丁酸鈉(Sodium butyrate,NaB)是一種組蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制劑,具有廣泛的生理功能包括調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖和腫瘤抑制功能。硫氧還蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)結(jié)合并負(fù)調(diào)控硫氧還蛋白(TRX)活性進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧還水平,同時(shí)作為一個(gè)轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控因子,TXNIP與HDACs結(jié)合并調(diào)控多個(gè)下游基因的表達(dá),參與細(xì)胞生長及代謝等重要功能。最
2、近研究表明TXNIP在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。因此本課題以非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549為細(xì)胞模型,探索丁酸鈉處理后TXNIP表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位變化及TXNIP對A549細(xì)胞遷移的影響。
方法:
流式細(xì)胞儀分析以及DAPI染色分析NaB對A549細(xì)胞的影響?;虮磉_(dá)芯片(Affermtry)分析NaB處理前后其基因表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)丁酸鈉處理A549細(xì)胞后TXNIP表達(dá)上調(diào),進(jìn)一步qPCR和Western blot分別
3、驗(yàn)證基因表達(dá)芯片結(jié)果,雙熒光素酶系統(tǒng)檢測NaB對TXNIP啟動(dòng)子活性的影響。過表達(dá)帶有綠色熒光標(biāo)簽的TXNIP質(zhì)粒,并用熒光顯微鏡觀察TXNIP在細(xì)胞中的定位。構(gòu)建A549細(xì)胞TXNIP knockdown穩(wěn)定細(xì)胞系,遷移實(shí)驗(yàn)檢測TXNIP knockdown之后對細(xì)胞遷移的影響。
結(jié)果:
(1) NaB處理誘導(dǎo)A549細(xì)胞死亡;
(2) NaB上調(diào)TXNIP表達(dá);
(3) NaB通過核轉(zhuǎn)錄因子N
4、F-YC(CCAAT)激活TXNIP轉(zhuǎn)錄;
(4) NaB不會改變?nèi)L或截短的TXNIP細(xì)胞內(nèi)定位;
(5) TXNIP knockdown對A549細(xì)胞遷移沒有影響,在NaB處理下TXNIPknockdown后促進(jìn)A549細(xì)胞遷移。
結(jié)論:
NaB通過核轉(zhuǎn)錄因子(Nulear Factor Y,NF-Y)激活TXNIP轉(zhuǎn)錄參與其誘導(dǎo)A549細(xì)胞死亡的過程。在NaB條件下TXNIP knockdo
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