通絡(luò)方劑對糖尿病大鼠腎臟P38MAPK-FN通路的影響.pdf

1、糖尿病腎病是糖尿病重要的微血管并發(fā)癥之一，它在病理結(jié)構(gòu)上主要以系膜增生，基底膜增厚為特點，最終出現(xiàn)腎小球硬化、間質(zhì)纖維化。P38是MAPK家族的成員之一，在糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展中起了重要作用，它參與細(xì)胞外基質(zhì)纖維化等諸多生理病理過程。通絡(luò)方劑(Tong luo Recipe,TLR)是根據(jù)中醫(yī)絡(luò)病學(xué)理論研制而成的復(fù)方制劑，由人參、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鱉蟲和赤芍等藥物組成，本課題組前期研究表明，其對糖尿病腎病具有保護(hù)作用，在糖尿病大鼠腎

2、臟中，可以通過抑制RAS系統(tǒng)、抗氧化、改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能等機(jī)制發(fā)揮作用。然而，通絡(luò)方劑對糖尿病腎臟纖維連接蛋白（FN）的影響，目前尚無相關(guān)報道。本實驗使用鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型，觀察TLR對糖尿病大鼠腎臟P38MAPK-FN通路相關(guān)蛋白及其病理結(jié)構(gòu)的影響，進(jìn)一步探討TLR對糖尿病腎臟保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　 本研究通過自動化生化分析儀檢測正常對照組、糖尿病組、通絡(luò)方劑干預(yù)組大鼠血糖、血尿素氮、血肌酐、左腎重/

3、體重、24小時尿蛋白、尿蛋白/肌酐比；腎皮質(zhì)PAS染色；電鏡觀察腎小球基底膜；蛋白質(zhì)印跡分析檢測t-p38MAPK，p-p38MAPK，t-CREB(環(huán)腺苷酸反應(yīng)元件結(jié)合蛋白，CAMP response element binding protein)，P-CREB，F(xiàn)N(纖維連接蛋白)蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)糖尿病組大鼠腎功能損害明顯，腎小球增大，系膜增生，p-p38MAPK，P-CREB，F(xiàn)N蛋白表達(dá)明顯增加，通絡(luò)方劑干預(yù)后，明顯改善腎功

4、能，下調(diào)p-p38MAPK，P-CREB，F(xiàn)N蛋白的表達(dá)。通絡(luò)方劑可能通過抑制p38MAPK-FN信號通路，對糖尿病腎病大鼠腎功能產(chǎn)生保護(hù)作用。
　　 目的：研究TLR對STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎臟p38MAPK-FN信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，探討TLR對糖尿病腎臟保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　 方法：研究對象：健康、無特定病原體（SPF）級SD大鼠。CON對照組（N=7），糖尿病未干預(yù)組DM（N=7）和糖尿病通絡(luò)方劑組DM+TLR

5、（N=7）。
　　 第一部分：采用全自動生化分析儀檢測大鼠靜脈空腹血糖、血尿素氮、血肌酐，尿肌酐，放射免疫法檢測24小時尿蛋白。腎皮質(zhì)PAS染色。電鏡觀察腎小球基底膜。
　　 第二部分：蛋白質(zhì)印跡分析檢測腎皮質(zhì)組織中t-p38MAPK，p-p38MAPK，t-CREB(環(huán)腺苷酸反應(yīng)元件結(jié)合蛋白，CAMP response element binding protein)，P-CREB，F(xiàn)N的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果

6、：
　　 1．一般情況：大鼠注射STZ 1周后，尾靜脈采血測血糖>16.7mmol/L，可確定糖尿病模型制備成功，造模成功率86.7％。此后每周監(jiān)測血糖1次，血糖均維持在l6.7 mmol/L以上，模型穩(wěn)定性良好。大鼠注射STZ后36～48 h出現(xiàn)多飲、多尿，第3～4天多食明顯，精神不振，毛發(fā)干枯，光澤度下降，“三多一少”癥狀典型。CON組大鼠飲食、飲水、尿量正常，毛發(fā)光亮，體質(zhì)量自然增加。經(jīng)通絡(luò)方劑治療后，糖尿病大鼠反應(yīng)靈敏，

7、毛發(fā)光澤度有所增加，“三多一少”癥狀減輕。
　　 2.大鼠生化指標(biāo)與CON組相比，DM組大鼠平均左腎重/體重比、血糖、血尿素氮、肌酐、24小時尿蛋白、尿蛋白/肌酐顯著增加（p<0.05）。與DM組相比，DM+TLR組除血糖、尿素氮之外，這些參數(shù)是顯著降低（p<0.05）。
　　 3.腎皮質(zhì)PAS染色DM組與DM+TLR組，可以看到腎小球增大，系膜基質(zhì)增生，CON組未顯示。與DM組相比，DM+TLR組大鼠基質(zhì)、系膜增生較少

8、。
　　 4．電鏡觀察腎小球基底膜DM組與DM+TLR組，可以看到腎小球基底膜增厚，CON組未顯示。與DM組相比，DM+TLR組大鼠腎小球基底膜增厚較少。
　　 5. 腎皮質(zhì)t-p38，p-p38,t-CREB，P-CREB,FN水平與CON組相比，DM組t-p38, t-CREB沒有改變（p>0.05），p-p38增加2.37（p<0.05）,p-CREB增加2.21（p<0.05）,FN增加2.03（p<0.05）；