慢性丙型肝炎抗病毒過程中T細(xì)胞亞群及其表面PD-1的表達變化.pdf

1、目的：HCV感染后大約80％可發(fā)展成慢性丙型肝炎(chronic hepatitisC，CHC)，目前HCV感染慢性化的確切機制尚不明確。在感染初期機體缺乏強有力的HCV特異性CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答可能是其呈慢性化發(fā)展的主要原因之一。程序性死亡受體-1(programmed death-1，PD-1)是表達于T細(xì)胞和B細(xì)胞表面的負(fù)性共刺激分子，在T、B細(xì)胞的免疫應(yīng)答中起負(fù)向調(diào)控作用。PD-1與其配體PD-L1或PD-L2結(jié)

2、合，可以削弱、限制或終止T細(xì)胞發(fā)揮功能。最近有研究發(fā)現(xiàn)，慢性HCV感染患者外周血T細(xì)胞PD-1的表達明顯高于正常人，同時T細(xì)胞處于功能耗竭狀態(tài)。然而，在應(yīng)用干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療的過程中，隨著HCV-RNA的下降，T淋巴細(xì)胞及其表面PD-1的表達變化情況鮮有報道。本研究旨在探討在CHC抗病毒治療過程中，隨著HCV-RNA的下降，外周血CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞及其表面PD-1的表達變化情況及其意義。
　　方法：選取慢性H

3、CV感染者25例，其中男性患者11例，女性患者14例，所有患者均符合抗病毒治療標(biāo)準(zhǔn)，且半年之內(nèi)未經(jīng)其他抗病毒治療及免疫調(diào)節(jié)治療，所有患者均應(yīng)用聚乙二醇干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療，以抗病毒治療的0周、4周、12周、24周及48周作為檢測時間點分組。健康對照10例。
　　1所有受試者留取新鮮抗凝外周靜脈血，采用密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，用CD3-

4、ECD、CD4-FITC、CD8-PE-Cy5、PD-1-PE抗體進行染色，并應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測外周血CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞及其表面的PD-1的表達情況。
　　2所有受試者留取新鮮抗凝外周靜脈血，密度梯度離心法分離PBMC，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)的方法，檢測PBMC上PD-1mRNA的表達情況。
　　結(jié)果：<

5、br>　　1臨床轉(zhuǎn)歸：25例患者中18例(72％)獲得RVR；5例(20％)獲得EVR；2例(8％)獲得PVR；25例(100％)獲得ETVR。
　　2 CHC患者在抗病毒治療過程中，T細(xì)胞亞群的變化：與正常對照組相比，丙型肝炎患者CD4+T增高，CD8+T降低，CD4+/CD8+增高，除48周組無統(tǒng)計學(xué)意義外，其他各組均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療后，與0周組比較，CD4+T細(xì)胞逐漸降低，除4周

6、組無統(tǒng)計學(xué)意義外，其他各組均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；CD8+T細(xì)胞逐漸升高，均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；CD4+/CD8+逐漸降低，均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　3 CHC患者在抗病毒治療過程中，CD4+T細(xì)胞上PD-1的表達變化：與正常對照組(2.92±0.87)相比，丙型肝炎患者CD4+T細(xì)胞上PD-1的表達(0、4、12、24、48周組：8.95±1.55，6.53±1.06，6.42±0.87

7、，5.12±0.58，4.42±0.58)明顯升高(P<0.01)；干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療后，CD4+T細(xì)胞上PD-1的表達逐漸降低，與0周組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　4 CHC患者在抗病毒治療過程中，CD8+T細(xì)胞上PD-1的表達變化：與正常對照組(1.11±0.39)相比，丙型肝炎患者CD8+T細(xì)胞上PD-1的表達(0、4、12、24、48周組：5.12±0.87，3.52±0.58，2.62±0.

8、58，1.81±0.29，1.51±0.39)明顯升高(P<0.01)；干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療后，CD8+T細(xì)胞上PD-1的表達逐漸降低，與0周組比較差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　5 RT-PCR法檢測PBMC上PD-1mRNA的表達：與正常對照組(0.81±0.01)相比，丙型肝炎患者PBMC上PD-1mRNA的表達(0、4、12、24、48周組：1.48±0.09，1.36±0.02，1.19±0.01，

9、1.02±0.01，0.82±0.03)明顯升高(P<0.01或0.05)；干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療后，PBMC上PD-1mRNA的表達逐漸降低(P<0.01或0.05)。
　　結(jié)論：
　　1慢性丙型病毒性肝炎患者體內(nèi)存在著T細(xì)胞亞群失衡，抗病毒治療可以使失衡的T細(xì)胞亞群趨于恢復(fù)正常，提示T細(xì)胞亞群失衡與HCV感染的慢性化有關(guān)，T淋巴細(xì)胞在清除HCV中發(fā)揮重要作用。
　　2慢性丙型肝炎患者，CD4+T和CD8+T細(xì)