大熊貓基因資源庫(kù)構(gòu)建及糞便高質(zhì)量DNA提取方法的建立.pdf_第1頁(yè)
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1、1.本文以大熊貓的成纖維細(xì)胞和肝組織細(xì)胞為材料，以pBeloBAC11為載體，構(gòu)建了大熊貓基因組的細(xì)菌人工染色體DNA文庫(kù)。該文庫(kù)包含了93700個(gè)克隆，分別保存于977塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。經(jīng)過(guò)對(duì)100個(gè)隨機(jī)抽樣的克隆分析表明，插入片段的平均大小為160kb，相當(dāng)于大熊貓基因組的5倍，即5個(gè)庫(kù)容量。酶切10個(gè)克隆證明，經(jīng)過(guò)100代繁殖后，其插入片段仍穩(wěn)定不變。 2.采用RNeasyMiniKit提取大熊貓肝臟和腦組織的總RNA

2、，經(jīng)oligotex試劑盒純化得到mRNA。利用SMART(switchingmechanismat5’endofRNAtranscript)技術(shù)，構(gòu)建了肝臟和腦組織的全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)。在構(gòu)建完成的文庫(kù)中，肝臟文庫(kù)含有約5.0×106個(gè)重組子，而腦組織文庫(kù)含有約3.5×106個(gè)重組子。在2個(gè)文庫(kù)中，插入的cDNA長(zhǎng)度為400bp-4kb，重組率高達(dá)90％以上。鑒定結(jié)果表明，大熊貓肝臟和腦組織cDNA文庫(kù)質(zhì)量良好，為進(jìn)一步篩選和克隆大熊貓

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