樹突狀細胞及CC趨化因子配體20在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用.pdf

1、第一部分:CD80、CD86、OX-62及洲C-Ⅱ在大鼠COPD肺泡灌洗液及外周血中的表達
　　 目的:探討慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺泡灌洗液(BALF)及外周血中樹突狀細胞(DCs)表面分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ和OX-62的差異表達。
　　 方法:選取雄性SPF級Wistar大鼠共74只隨機分為三組:正常對照組(n=24)、COPD模型組(n=40)和戒煙組(n=10)。COPD模型組大鼠第1、15天

2、氣道內(nèi)注入200ug/200ul脂多糖(LPS)溶液,第2-28天(第15天除外)連續(xù)每天被動吸煙2次,30min×12支/次;戒煙組大鼠造模方法同COPD模型組,第29天至42天不加任何干預措施。第7天、14天、21天及28天分別隨機選取正常組大鼠6只、COPD組大鼠6只,第42天取戒煙組大鼠6只。大鼠肺組織石蠟包埋HE染色觀察大鼠肺組織病理學改變,流式細胞技術(shù)(FCM)檢測COPD組和正常對照組大鼠BALF及外周血中DCs表面的細胞

3、因子CD80、CD86、OX-62及MHC-Ⅱ的表達量。
　　 結(jié)果:第7天、14天、21天及28天肺組織病理HE染色顯示氣道炎癥和肺氣腫表現(xiàn),第28天出現(xiàn)明顯肺氣腫表現(xiàn),第42天與28天無明顯差別。模型組大鼠外周血中CD80、CD86及OX-62百分比較正常對照組增加,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.001),MHC-Ⅱ百分比較對照組減少,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。COPD模型組大鼠BALF中CD

4、80及CD86百分比較正常對照組增加,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05,P＜0.05),OX-62及MHC-Ⅱ百分比與正常對照組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。正常對照組與COPD模型組中CD80、CD86、OX-62及MHC-Ⅱ在BALF和外周血中的變化無相關(guān)性。
　　 結(jié)論:COPD大鼠第28天病理表現(xiàn)已符合人類的特征性改變,提示COPD大鼠模型成功建立,且較穩(wěn)定。COPD模型組大鼠外周血及BALF中DCs數(shù)量增加,提示DC

5、s在肺內(nèi)的募集可能參與了COPD的炎癥反應(yīng)過程。
　　 第二部分:DCs及CCL20在大鼠COPD發(fā)病機制中的作用研究
　　 目的:通過CCL20單克隆抗體干預COPD模型組大鼠疾病進展,制備CCL20抑制組模型,研究DCs及CC亞族趨化因子配體20(CCL20)在CCL20抑制組和COPD組大鼠BALF及外周血中的變化,進一步探討DCs在COPD發(fā)病機制中的作用及CCL20在其中所起的作用。
　　 方法:選取雄

6、性SPF級Wistar大鼠共26只隨機分為三組:正常對照組(n=6),COPD模型組(n=10)和CCL20抑制組(n=10)。COPD模型組及CCL20抑制組大鼠第1、15天氣道內(nèi)注入200ug/200ulLPS溶液,第2-28天(第15天除外)連續(xù)每天被動吸煙2次,30min×12支/次,另CCL20抑制組大鼠第1天注LPS前腹腔注射CCL20單克隆抗體(100ug/只);正常對照組大鼠正常喂養(yǎng),不加任何干預措施。取大鼠肺組織石蠟包

7、埋HE染色觀察肺組織病理學改變,酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測BALF及外周血中CCL20的含量,FCM檢測BALF及外周血中DCs各細胞因子的變化。
　　 結(jié)果:CCL20抑制組大鼠外周血中CCL20的含量高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001),與COPD組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);BALF中CCL20含量高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),低于COPD組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。外周

8、血中,CCL20抑制組大鼠CD80百分比高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),與COPD組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);CD86及OX-62百分比與正常對照組差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05),低于COPD組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05,P＜0.001);MHC-Ⅱ百分比低于正常對照組,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01),與COPD組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。BALF中,CCL20抑制組大鼠CD80百分比高于

9、正常對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01),低于COPD組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);CD86百分比高于正常對照組,差異有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.001),與COPD組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);MHC-Ⅱ及OX-62百分比與正常對照組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),與COPD組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。正常對照組、COPD模型組及CCL20抑制組中CD80、CD86、OX-62及MHC-Ⅱ在BALF和外周血中

10、的變化無相關(guān)性,CCL20抑制組中CCL20在BALF和外周血中的含量變化呈正相關(guān)關(guān)系。
　　 結(jié)論:CCL20抑制組CCL20的含量在外周血中較正常組的增多,BALF中較正常組的增多和較COPD組的減少,提示CCL20參與了COPD的發(fā)病過程,CCL20抗體對該發(fā)病過程可能有一定的抑制作用。CCL20抑制組外周血中CD86和OX-62百分比較COPD組減少,在BALF中CD80百分比較COPD組減少,但較正常組增加,提示CCL