Calcein-AM檢測凋亡過程中線粒體膜通透性變化研究.pdf

1、第一部分：Calcein-AM檢測細胞早期凋亡方法的確立 背景和目的：眾多研究均提示線粒體在控制細胞死亡中起重要作用，凋亡早期時線粒體膜通透性即可發(fā)生變化。已有學者報道，與Calcein-AM共同孵育的細胞，其線粒體基質能被Calcein特異性熒光染色，而胞質中的Calcein熒光可被Co2+猝滅。此種特異性陽性染色要求線粒體內膜功能(通透性)完整，以便作為屏障將胞漿內Co2+與線粒體基質內的Calcein隔開。本實驗旨在利用此

2、原理建立一種新的檢測細胞早期凋亡的方法并論證其可行性。 方法：將人類急性T淋巴細胞白血病細胞株(Molt-4)與Calcein-AM及Cocl2共同孵育染色，再經喜樹堿(CPT)、紫外線(UV)誘導凋亡發(fā)生，用流式細胞儀檢測凋亡誘導后不同時間點Calcein熒光(FL1)的變化。 結果：(1)不同凋亡誘導方式下，誘導后培養(yǎng)一定時間，Calcein熒光(FL1)低信號區(qū)域均比相應對照增多；(2)同種誘導方式下，隨著誘導后培

3、養(yǎng)時間的延長，Calcein熒光(FL1)低信號區(qū)域逐漸增多；(3)同種誘導方式及誘導后培養(yǎng)時間下，隨著誘導因素強度的增加，Calcein熒光(FL1)低信號區(qū)域增多。 結論：Calcein-AM可以作為一種敏感的活細胞染料，用于流式細胞術中檢測早期凋亡。 第二部分：Calcein-AM和AnnexinV用于流式細胞術檢測早期凋亡敏感性的比較 目的：比較Calcein-AM與AnnexinV用于流式細胞儀檢測活細

4、胞早期凋亡時的敏感性，以建立一種新的檢測早期凋亡的方法。 方法：將人類急性T淋巴細胞白血病細胞株(Molt-4)經喜樹堿(CPT)、紫外線(UV)誘導后，分別采用Calcein-AM及異硫氰酸熒光素標記的膜聯(lián)蛋白V(AnnexinV)進行標記，然后用流式細胞術分析凋亡率，通過比較凋亡誘導后不同時間點的凋亡率來分析Calcein-AM和AnnexinV對于檢測細胞早期凋亡的敏感性。 結果：在喜樹堿誘導模型中，加藥后2小時即