MDR2基因在高脂血癥大鼠肝臟中的表達(dá)變化及意義.pdf

1、目的:研究高脂血癥大鼠MDR2基因及其編碼蛋白Pgp3的表達(dá),以探討MDR2基因和Pgp3的表達(dá)變化及意義,從而為防治高脂血癥提供新的依據(jù)和分子理論基礎(chǔ)。方法:8周齡SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后隨機(jī)分成對(duì)照組和模型組,每組10只,分別用普通飼料和高脂飼料飼養(yǎng),自由飲水。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,于6周末稱重,在0.25％戊巴比妥鈉麻醉下處死大鼠,心臟采血運(yùn)用全自動(dòng)生化儀測(cè)定各組大鼠血清總膽固醇(TC,mmol/L)、甘油三酯(TG,mmol/L)及肝

2、功能指標(biāo):各組大鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT,U/L),天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST,U/L)。迅速取出肝臟稱肝濕重,計(jì)算:肝濕質(zhì)量/體質(zhì)量×100％,即為肝指數(shù)。并在肝左葉中部切取1cm×1cm×1cm組織2塊,一塊置于10％甲醛固定后制備石蠟切片；一塊放入無(wú)菌凍存管內(nèi),并予以分組編號(hào),-70℃凍存?zhèn)溆?。石蠟切?行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察肝組織光鏡下的病理改變,并觀察肝臟纖維化程度:用免疫組化技術(shù)檢測(cè)兩組肝組織Pgp3表達(dá)狀況,采

3、用圖像分析系統(tǒng)作積分光密度測(cè)定；RT-PCR檢測(cè)MDR2基因mRNA表達(dá)狀況,Biod-rad軟件分析對(duì)照組與試驗(yàn)組MDR2 mRNA灰度值。灰度值表示MDR2基因的mRNA表達(dá)量,積分光密度值表示Pgp3蛋白表達(dá)量。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,采用t檢驗(yàn)；組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)；檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)大鼠20只全部進(jìn)入結(jié)果分析。(1)造模組大鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)、

4、血脂及血清轉(zhuǎn)氨酶水平明顯增高,肝組織脂肪變,少數(shù)出現(xiàn)纖維化表現(xiàn)。TC在造模組為(3.32±0.20)mmol/L,較正常對(duì)照組(1.86±0.15)mmol/L明顯升高,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TG在造模組為(1.9±0.28)mmol/L較正常對(duì)照組(0.78±0.16)mmol/L明顯升高,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。造模組肝指數(shù)為(3.03±0.29)％較對(duì)照組(2.28±0.39)％明顯升高,差異有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)免疫組織化學(xué)染色顯示,在高倍物鏡下Pgp3蛋白在肝細(xì)胞膜呈明顯棕黃色表達(dá),呈片狀分布,范圍擴(kuò)大。采用積分光密度值(IOD)作分析,在造模組IOD為(14.41±6.33),與對(duì)照組(6.70±1.82)比較顯著增加。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)RT-PCR法檢測(cè)肝臟MDR2表達(dá),造模組MDR2基因擴(kuò)增帶亮度明顯高于對(duì)照組。造模組的灰度值為(2.23±0.38),正常對(duì)照組為(0.7