p38MAPK信號通路在逆灸防治阿爾茨海默病模型大鼠中的作用研究.pdf

1、目的：
　　 阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD),是一種嚴重危害中老年人身心健康的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,臨床表現(xiàn)為進行性的認知功能障礙、學習記憶能力減退、情感障礙、行為失常,最終導致生活自理能力喪失。在老年人群中,AD已成為繼腫瘤、心臟病和中風之后的第四位死亡原因,給家庭及社會帶來沉重的負擔和痛苦。隨著我國人口的老齡化,AD的發(fā)病呈現(xiàn)出較快的增長趨勢,業(yè)已成為嚴重的公共健康問題。由于AD病程較長,病情較重

2、,中晚期AD的治療效果不佳且治療費用高,因此研究AD的側(cè)重點應轉(zhuǎn)向早期診斷和早期干預。本課題將聚集態(tài)Aβ25-35立體定向注入大鼠雙側(cè)海馬造成AD模型,通過逆灸“百會”“腎俞”、“足三里”進行防治,研究p38MAPK信號通路介導的炎癥反應在逆灸防治AD中的作用機制。
　　 方法：
　　 健康雄性SD大鼠(15月齡)50只,體重350～480g,先進行Y型水迷宮篩選,淘汰反應過于遲鈍或特別敏感的大鼠,將合格大鼠按隨機數(shù)字表

3、法分為4組,正常組、假手術(shù)組、模型組、逆灸組,每組10只。逆灸組處理方法是對正常大鼠先施于艾灸刺激。于正常大鼠“百會”、“腎俞”、“足三里”穴上方2～3cm處懸灸(“腎俞”、“足三里”左右隔日交替使用),每穴持續(xù)5分鐘,每日1次,6日為1療程,療程間休息1日,共3個療程。施灸結(jié)束當日即開始給大鼠雙側(cè)海馬區(qū)注射Aβ25-35建立AD模型,造模后次日繼續(xù)艾灸治療1療程。Morris水迷官行為學試驗測定其學習記憶能力,透射電鏡觀察逆灸對AD模

4、型大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞超微結(jié)構(gòu)的影響,免疫組化SP法觀察逆灸對AD模型大鼠海馬區(qū)磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶(P-p38MAPK)、炎癥介質(zhì)環(huán)氧合酶2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)表達情況的影響。全部數(shù)據(jù)輸入計算機,用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行處理,實驗結(jié)果以(-x±s)表示。
　　 結(jié)果：
　　 (1)從Morris水迷宮試驗中我們發(fā)現(xiàn),各組大鼠逃避潛伏期隨著游泳天數(shù)的增加而逐漸縮短,說明各組大鼠在

5、5天游泳訓練中,對于尋找平臺均有一定的學習記憶能力,但各組之間學習記憶能力有很大差異。Aβ25-35聚集液立體定向注入大鼠雙側(cè)海馬后,模型組大鼠5天平均潛伏期及后3天平均潛伏期均較其他組明顯延長,穿過原平臺位置的次數(shù)比其他各組明顯減少。定位航行試驗及空間探索試驗中,模型組大鼠象限百分比亦明顯比其他各組少,與正常組及假手術(shù)組比較,有極顯著性差異(P＜0.01),說明模型組大鼠學習記憶能力顯著降低,雙側(cè)海馬一次性注射Aβ25-35制備AD模

6、型成功。與模型組比較,逆灸組大鼠5天平均潛伏期和后3天平均潛伏期均明顯縮短,穿過原平臺位置的次數(shù)明顯增多,在實驗平臺象限的游泳距離占總距離百分比明顯增高,經(jīng)統(tǒng)計學分析,有極顯著性差異(P＜0.01)。說明逆灸是預防學習記憶障礙疾病的有效方法,逆灸對AD模型大鼠的學習記憶障礙具有明顯改善作用。
　　 (2)透射電鏡觀察結(jié)果顯示,正常組和假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞胞膜完整,細胞漿和細胞器電子密度均勻,線粒體結(jié)構(gòu)清楚,線粒體嵴清

7、晰可見,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)排列整齊,未見明顯病變。模型組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元出現(xiàn)程度不等的退行性改變,神經(jīng)元體積縮小,一些固縮神經(jīng)元散在分布于變性腫脹的神經(jīng)元之間,細胞漿和細胞器密度增高,細胞核形態(tài)不規(guī)則,細胞器結(jié)構(gòu)破壞,顯示不清,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,脂褐素沉積增多,線粒體數(shù)目減少,線粒體腫脹,基質(zhì)清淡、有空泡,甚至見大量線粒體嵴呈畸形樣改變或缺失.逆灸組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞水腫減輕,線粒體、高爾基體、核糖體較模型組明顯增多.細胞器可見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張

8、,線粒體輕度腫脹.逆灸對AD模型大鼠海馬神經(jīng)細胞的超微結(jié)構(gòu)退變有明顯改善作用。
　　 (3)模型組大鼠海馬區(qū)P-038MAPK、COX-2、PGE2的表達明顯增加,表現(xiàn)為陽性神經(jīng)元平均灰度值明顯下降,與正常組及假手術(shù)組比較,有極顯著性差異(P＜0.01).逆灸組大鼠海馬區(qū)P-p38MAPK、COX-2、PGE2的表達明顯減少,表現(xiàn)為陽性神經(jīng)元平均灰度值明顯上升,與模型組比較,有極顯著性差異(p＜0.01).
　　 結(jié)論：

9、
　　 海馬區(qū)注射Aβ25-35可以激活p38MAPK信號轉(zhuǎn)導途徑,p38MAPK的激活導致炎癥介質(zhì)COX-2、PGE2的上調(diào),從而誘導AD大鼠腦內(nèi)神經(jīng)元的退行性改變,引起大鼠學習記憶障礙。逆灸治療可引起P-p38MAPK、COX-2、PGE2在海馬區(qū)的表達明顯減少,可抑制注射Aβ導致的大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細胞損傷變性,促進神經(jīng)細胞的修復,逆灸對AD模型大鼠海馬神經(jīng)細胞的超微結(jié)構(gòu)退變有明顯改善作用。逆灸防治AD的作用機制,可能是通過抑