血漿髓過氧化物酶雙抗體夾心光激化學(xué)發(fā)光方法的建立和臨床初步應(yīng)用.pdf

1、在發(fā)達(dá)國家冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（簡稱冠心?。┚佑谒劳鲈虻氖孜?。中國冠心病的發(fā)病率和死亡率雖然較發(fā)達(dá)國家低，但是隨著社會和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，亦逐年上升；已成為我國成人死亡的重要原因。急性冠狀動脈綜合征（acute coronarysyndrome，ACS)是冠狀動脈易損斑塊破裂或血栓形成導(dǎo)致的嚴(yán)重心肌缺血事件，占冠心病病人總數(shù)的30％～40％，是近年心血管疾病研究的熱點(diǎn)。ACS 包括不穩(wěn)定型心絞痛、非ST 段抬高型心肌梗死和ST 段抬高型

2、心肌梗死?，F(xiàn)有研究認(rèn)為，炎癥反應(yīng)和易損斑塊破裂互為因果，并啟動了ACS 病理生理機(jī)制的一個(gè)惡性循環(huán)過程。在此基礎(chǔ)上繼發(fā)血栓形成，導(dǎo)致了臨床上的ACS。髓過氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO) 具有促炎、促動脈粥樣硬化的作用，影響粥樣斑塊的穩(wěn)定性，并通過增強(qiáng)氧化應(yīng)激和氧化修飾等作用促進(jìn)動脈粥樣硬化的形成，參與了動脈粥樣斑塊發(fā)展的演變過程。MPO作為一種新的預(yù)測ACS的炎癥標(biāo)志物，其表達(dá)和活性升高是ACS 發(fā)生的原因。經(jīng)皮冠狀

3、動脈介入治療(percutaneous coronary interventions，PCI)是目前治療冠心病的一種有效手段，但再狹窄是制約這一技術(shù)應(yīng)用的主要問題。支架置入對狹窄血管的作用是一種“有控制的損傷”。對損傷的修復(fù)過程是支架置入后一種普遍存在的、基本的血管反應(yīng)，涉及到局部炎癥反應(yīng)、多種細(xì)胞因子和生長因子介導(dǎo)的局部血管重建和再塑以及血管平滑肌細(xì)胞遷移、增殖、凋亡等諸多環(huán)節(jié)。如何防止PCI術(shù)后冠狀動脈再狹窄一直是全球心血管醫(yī)師討論

4、的熱點(diǎn)話題。該課題研究的重點(diǎn)是建立檢測血漿MPO的雙抗體夾心光激化學(xué)發(fā)光免疫法，進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。在此基礎(chǔ)上應(yīng)用所建的方法對ACS患者冠脈支架置入前后血漿MPO的水平變化進(jìn)行評估。
　　 目的：建立一種定量檢測血漿中MPO濃度的雙抗體夾心光激化學(xué)發(fā)光免疫檢測法（LiCA），用于心血管疾病的輔助診斷；分別觀察冠脈造影前后和冠脈支架置入前后患者血漿MPO、hs-CRP、IL-6、cTnI水平及WBC 計(jì)數(shù)等的變化，進(jìn)一步探討關(guān)于冠脈

5、支架置入后患者血中相關(guān)炎癥因子水平變化的臨床意義。
　　 方法：采用棋盤格滴定法，從針對MPO抗原的12種單克隆抗體（McAbs）中篩選出最佳雙抗體組合（一種McAb 包被發(fā)光微粒，另一種McAb 進(jìn)行生物素化），進(jìn)而確定雙抗體最適反應(yīng)濃度及MPO-LiCA的最適反應(yīng)條件，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，評價(jià)該法的敏感性、可重復(fù)性以及回收率等指標(biāo)，并與經(jīng)典的CardioMPO 酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行平行比較分析。對冠脈造影前后和冠脈支架置入前后的臨床

6、資料進(jìn)行比較分析，包括：性別、年齡以及MPO、cTnI、hs-CRP、IL-6、WBC 計(jì)數(shù)、肌酐、尿酸、血糖、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、同型半胱氨酸等的水平（血漿MPO 采用CardioMPO 酶聯(lián)免疫法檢測所得，其它指標(biāo)均經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長海醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科檢測獲得）。研究中采用SPSS16.0軟件和EXCEL 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：篩選到兩種最適McAbs，并與鏈霉親和素包被的感光微

7、粒連接，成功建立了MPO定量檢測的LiCA 方法。該法檢測的敏感性為1.76 ng/ml，在5～500ng/ml范圍內(nèi)線性良好。批內(nèi)變異系數(shù)和天批間變異系數(shù)分別為2.73％和3.76％，平均回收率102.5％，MPO濃度高達(dá)800ng/ml時(shí)無Hook 效應(yīng)。80份臨床冠脈支架置入術(shù)前后患者血漿MPO的測定結(jié)果與CardioMPO 酶聯(lián)免疫法比較具有良好的相關(guān)性（r=0.961）。冠脈造影前后病人血漿MPO水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0

8、.454），hs-CRP和IL-6水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為：P<0.001，P=0.013），造影后顯著升高。冠脈支架置入術(shù)前后患者血漿MPO、hs-CR和IL-6水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為：P<0.001，P<0.001，P=0.018），支架置入術(shù)后顯著高于支架置入術(shù)前。
　　 結(jié)論：成功建立了一種MPO 定量檢測的LiCA 新方法，與CardioMPO 酶聯(lián)免疫法相比，該法具有更高的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，且測定范