CCNG2在人甲狀腺乳頭狀癌K1細胞中的表達及其對K1細胞增殖凋亡影響的研究.pdf

1、目的:細胞周期蛋白G2(CyclinG2，CCNG2)是細胞周期蛋白家族中發(fā)現(xiàn)較晚的一員。近年來對其的研究發(fā)現(xiàn)，CCNG2具有抑制細胞增殖、促進凋亡，負性調控腫瘤細胞增殖的作用。本研究旨在探討CCNG2基因在甲狀腺乳頭狀癌K1細胞中的表達情況及其對K1細胞增殖、凋亡的影響，并期望通過實驗了解CCNG2基因在上述過程中可能的作用機制，為以CCNG2為靶點的甲狀腺乳頭狀癌治療提供實驗依據。
　　方法:
　　1構建載有CCNG2基

2、因的質粒pEGFP-N1-CCNG2，優(yōu)化轉染條件后轉染體外甲狀腺乳頭狀癌K1細胞，Western blot法檢測轉染結果。
　　2 MTT、流式細胞術分別檢測空白對照組、陰性對照組、實驗組K1細胞增殖、凋亡情況。Western blot法、免疫細胞化學染色法檢測CCNG2、p53、mdm2蛋白表達情況。
　　3上述實驗均重復3次或以上，結果以均數±標準差(x±S)表示。計量資料行正態(tài)性檢驗及方差齊性檢驗后采用方差分析，多組

3、數據兩兩比較采用LSD-t檢驗。所有實驗數據均用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1轉染條件的優(yōu)化及檢測:不同比例DNA與轉染試劑Lipofectamine2000混合后轉染細胞，各組轉染效率有差異，其中DNA(ug):Lipofectamine2000(ul)為1∶5時轉染效率最高，達(77.33±3.79)％(P＜0.05);不同細胞融合度時接受轉染，轉染效率有差

4、異，以細胞融合度達50～60％時轉染效率最佳，為(90.33±1.53)％(P＜0.05)。
　　2 MTT檢測細胞增殖結果:分別于轉染24h、48h、72h、96h行MTT檢測，與對照組比較實驗組各時間點均出現(xiàn)生長抑制，并于轉染72小時抑制效應最明顯達35.40％(P＜0.05)，空白對照組與陰性對照組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　3 FCM檢測細胞凋亡結果:轉染48小時后，實驗組較空白對照組、陰性對照組早期凋

5、亡率明顯升高[(5.48±0.35)％ vs(1.06±0.05)％、(1.12±0.09)％](P＜0.05);實驗組較空白對照組、陰性對照組晚期凋亡率顯著升高[(9.90±0.94)％ vs(2.65±0.20)％、(1.58±0.28)％]（P＜0.05），空白對照組與陰性對照組比較，細胞早期、晚期凋亡率差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4 Western Blot檢測結果:轉染48小時后，實驗組CCNG2蛋白相對表

6、達量較空白對照組、陰性對照組顯著升高(0.72±0.053 vs0.36±0.032、0.37±0.040)(P＜0.05)，而兩對照組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。轉染48小時后，實驗組與對照組相比，p53、mdm2蛋白表達水平明顯上調(P＜0.05)，空白對照組與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。分別轉染pEGFP-N1-CCNG224h、48h、72h，CCNG2蛋白表達持續(xù)增加，p53、mdm2蛋白表達水平

7、上調且與CCNG2表達趨勢具有一致性。
　　5免疫細胞化學染色法結果:轉染pEGFP-N1-CCNG248h后實驗組CCNG2、p53、mdm2蛋白表達陽性水平明顯高于對照組。
　　結論:
　　1體外實驗顯示，瞬時轉染技術使CCNG2基因在甲狀腺乳頭狀癌K1細胞產生過表達并具有抑制細胞增殖，促進細胞凋亡的作用。
　　2轉染CCNG2基因后CCNG2、p53蛋白表達上調，推測CCNG2通過上調p53蛋白表達水平起到