他汀及血脂康對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞分泌型磷酯酶A2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　動(dòng)脈粥樣硬化是以血管炎癥病變形成為特征的多因子疾病，其中ⅡA型分泌性磷脂酶A2參與動(dòng)脈粥樣硬化的血管炎癥過程，并有一定抗炎作用。當(dāng)今，他汀類藥物和血脂康對(duì)心血管系統(tǒng)有多效性的影響，而被廣泛運(yùn)用于臨床對(duì)心血管疾病相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)防和治療。然而，目前二者對(duì)ⅡA型分泌性磷脂酶A2的具體作用仍不清楚。因此，我們分別研究了他汀和血脂康對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞表達(dá)ⅡA型分泌性磷脂酶A2的調(diào)控，從而進(jìn)一步為二者在心血管疾病運(yùn)用中的機(jī)制提

2、供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.細(xì)胞培養(yǎng):取130-150gSD大鼠胸主動(dòng)脈，分離中層平滑肌，培養(yǎng)，鑒定，傳代，用狀態(tài)穩(wěn)定良好的2-5代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組:第一部分:用不同濃度或不同時(shí)間的大鼠炎癥因子白介素-1β(IL-1β)誘導(dǎo)出平滑肌細(xì)胞高表達(dá)ⅡA型分泌型磷脂酶A2作為模型;第二部分:給予細(xì)胞洛伐他汀或辛伐他汀培養(yǎng)不同濃度或不同時(shí)間;第三部分:在IL-1β20ng/ml存在條件下，分別給予不同濃度或時(shí)間

3、的洛伐他汀孵育;第四部分:在有IL-1β20ng/ml誘導(dǎo)的前提下，分別給予細(xì)胞不同濃度或時(shí)間的血脂康共孵育后收集細(xì)胞及上清液。
　　3.取上清液分別用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA和酶活性對(duì)比試劑檢測(cè)ⅡA型分泌型磷脂酶A2酶蛋白含量和活性，記錄結(jié)果。
　　4.收集細(xì)胞，提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)ⅡA型分泌型磷脂酶A2 mRNA的表達(dá)，記錄結(jié)果。
　　5.上述實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)

4、計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鑒定結(jié)果:形態(tài)學(xué)鑒定，相差顯微鏡下，細(xì)胞分布均勻，局部成束的細(xì)胞平行排列，部分區(qū)域細(xì)胞多層重疊，部分區(qū)域高低起伏呈“峰、谷”狀生長(zhǎng)。平滑肌細(xì)胞特異性肌動(dòng)蛋白(抗α-actin)免疫組化染色＞98％的細(xì)胞染色陽(yáng)性，即胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色反應(yīng)，胞核不著色。鑒定結(jié)果為大鼠血管平滑肌細(xì)胞。
　　2.分子生物結(jié)果:對(duì)照組在不加任何刺激因素的情況下，細(xì)胞能表達(dá)極少量的sPLA2-ⅡA

5、。第一部分:IL-1β(10，20，50，100ng/ml)刺激組能誘導(dǎo)sPLA2-ⅡA mRNA、蛋白含量及酶活性比對(duì)照組，均明顯增加，且有顯著差異性P＜0.01; IL-1β20ng/ml誘導(dǎo)不同時(shí)間（6，12，24，36小時(shí)），sPLA2-ⅡA mRNA、酶含量及活性均比對(duì)照組增加明顯P＜0.01，且呈一定時(shí)間梯度增加趨勢(shì)。第二部分:給予細(xì)胞洛伐他汀或辛伐他汀培養(yǎng)不同濃度(1，2μmol/l)或不同時(shí)間（12，24，36小時(shí)）刺激

6、后，sPLA2-ⅡA mRNA、含量及酶活性較對(duì)照組增加明顯P＜0.01，呈緩慢增加梯度。第三部分:在IL-1β20ng/ml與不同濃度（0.5，1，2μmol/l）或2μmol/l的洛伐他?。?2，24，36小時(shí)）共孵育后，與對(duì)照組相比，共刺激組sPLA2-ⅡA含量明顯增加，與模型組相比，實(shí)驗(yàn)組sPLA2-ⅡA mRNA、酶分泌量和活性增加顯著P＜0.01，并且呈劇烈的梯度上升趨勢(shì)，其中，在轉(zhuǎn)錄水平最為明顯。第四部分:在IL-1β20

7、 ng/ml與不同濃度(25，50，100，200μg/ml)或100μg/ml的血脂康（12，24，36，48小時(shí)）共孵育后，與對(duì)照組相比，共刺激組sPLA2-ⅡA含量增加，但與模型組相比，實(shí)驗(yàn)組sPLA2-ⅡA mRNA、酶分泌量及活性均明顯減少P＜0.01，并且呈一定降低趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　1.他汀和IL-1β均能分別溫和刺激大鼠血管平滑肌細(xì)胞中sPLA2-ⅡA的表達(dá)，但二者的聯(lián)合能夠協(xié)同強(qiáng)烈刺激sPLA2-ⅡA