不同年齡大鼠的脂肪移植后存活率的比較及富血小板血漿對其的影響.pdf

1、第一部分、不同年齡大鼠的脂肪移植后存活率的比較
　　目的：建立不同年齡SD大鼠來源的脂肪組織在同一受體移植的動物模型，對比觀察研究年齡因素對移植脂肪存活的影響，為臨床脂肪移植應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法：
　?。ㄒ唬┰隗w實驗，取4周齡(n=36)、10月齡(n=36)、18月齡(n=36)三個年齡組的SD大鼠的脂肪組織，注射移植到同一只SD大鼠的背部，在移植術(shù)后24h，24h，48h，72h，96h，5d，7d，14d，4

2、w，8w，分別對脂肪移植物進(jìn)行超聲造影檢查，測量移植物血流灌注指數(shù)、造影劑充盈率；然后取移植物標(biāo)本，測量移植物的體積，并制作HE染色、Perilipin免疫熒光染色、CD31免疫組織化學(xué)染色切片，行組織學(xué)檢查，比較不同年齡組間移植脂肪組織的存活脂肪細(xì)胞的數(shù)量，脂肪存活區(qū)面積，新生脂肪細(xì)胞數(shù)量，新生的微血管密度，移植物存活率，移植脂肪存活指數(shù)；
　?。ǘw外實驗：分離4周齡、10月齡、18月齡三個年齡組SD大鼠的脂肪來源干細(xì)胞，體

3、外培養(yǎng)，描繪各組生長曲線；各組成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)9天，油紅O染色，比較分析脂滴個數(shù)、面積。
　　結(jié)果：SD大鼠的脂肪組織在移植后出現(xiàn)從缺血退化到再生的動態(tài)組織重塑過程，移植物最外層的脂肪細(xì)胞存活，內(nèi)層脂肪細(xì)胞全部壞死退化，組織重塑過程中出現(xiàn)脂肪細(xì)胞新生、血運重建；術(shù)后第8周時，移植物尚未完成組織重塑。4周齡組的脂肪組織在移植后前3天內(nèi)存活脂肪細(xì)胞數(shù)目，移植后第4天時超聲造影劑充盈率，移植后1周時存活區(qū)面積比，移植后8周時移植物存活指

4、數(shù)明顯高于10月齡、18月齡組；10月齡與18月齡組間無明顯差異。4周齡SD大鼠的脂肪來源干細(xì)胞數(shù)量較多、體外增長速度快，成脂分化第9天形成脂滴的數(shù)量、脂滴所占面積大于其他兩個年齡組，但10月齡與18月齡組間無明顯差異。
　　結(jié)論：4周齡大鼠的脂肪組織在移植后，脂肪組織的早期存活、血運重建、脂肪細(xì)胞再生、脂肪組織存活率方面明顯優(yōu)于10月齡、18月齡組。移植脂肪存活指數(shù)能更準(zhǔn)確的反應(yīng)脂肪組織的存活。
　　第二部分、富血小板血漿

5、對不同年齡大鼠脂肪移植物的作用
　　目的：對比研究富血小板血漿（PRP）對不同年齡的SD大鼠脂肪移植物存活的影響，并探討其機制，為PRP應(yīng)用于臨床脂肪移植提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　（一）在體實驗，取4周齡(n=36)、18月齡(n=36)的SD大鼠的脂肪組織，分為PRP組：A.4周齡大鼠的顆粒脂肪1ml+ PRP250μl+ CaCl225μl（n=36）；B.18月齡大鼠的顆粒脂肪1ml+PRP250μl+ C

6、aCl225μl（n=36）；注射移植到實驗組同一受體的背部左右側(cè)；對照組：C.4周齡SD大鼠的顆粒脂肪1ml（n=36）；D.18月齡SD大鼠的顆粒脂肪1ml（n=36）；注射移植到實驗組同一受體的背部左右側(cè)。在移植術(shù)后24h，24h，48h，72h，96h，5d，7d，14d，4w，8w，分別對脂肪移植物進(jìn)行超聲造影檢查，測量移植物血流灌注指數(shù)；然后取移植物標(biāo)本，測量移植物的體積，并制作HE染色、Perilipin免疫熒光染色、CD

7、31免疫組織化學(xué)染色切片，行組織學(xué)檢查，比較不同年齡組間移植脂肪組織的存活脂肪細(xì)胞的數(shù)量，脂肪存活區(qū)面積，新生脂肪細(xì)胞數(shù)量，新生的微血管密度，移植物存活率，移植脂肪存活指數(shù)；
　?。ǘw外實驗：分離4周齡、18月齡SD大鼠的脂肪來源干細(xì)胞體外培養(yǎng)，分為實驗組：a.PRP處理4周齡組、b.PRP處理18月齡組，對照組：c.4周齡組 d.18月齡組，cck-8法測定不同組體外增殖情況；各組成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)9天，油紅O染色，比較分析脂

8、滴個數(shù)、面積。
　　結(jié)果：PRP組脂肪移植物在移植后前3天內(nèi)存活脂肪細(xì)胞數(shù)目，移植后第4天時超聲造影劑充盈率，移植后1周時存活區(qū)面積比，移植后8周時移植物存活指數(shù)明顯高于同年齡的對照組。加入PRP培養(yǎng)后，各年齡組SD大鼠的脂肪來源干細(xì)胞形態(tài)未受影響，增殖速度、形成脂滴的數(shù)量和面積比，較對照組顯著提高。
　　結(jié)論：PRP促進(jìn)各年齡組移植脂肪組織的早期存活、血運重建、脂肪再生，提高脂肪組織存活率；促進(jìn)各年齡組大鼠來源干細(xì)胞的增殖