PHLPP、FOXO3a和RAD51在卵巢漿液性癌中的表達及臨床意義.pdf

1、目的：卵巢上皮性腫瘤是卵巢腫瘤中最常見的組織學類型，占原發(fā)性卵巢腫瘤50％~70%，占卵巢惡性腫瘤的85%~90%，是女性生殖器官腫瘤中病死率最高的惡性腫瘤。卵巢上皮性腫瘤的病理學類型包括卵巢漿液性癌、粘液性癌、子宮內(nèi)膜樣癌、透明細胞癌、移行細胞癌，其中卵巢漿液性癌最常見，約占卵巢上皮性癌的40-60%。近年來通過對形態(tài)學、分子生物學等的研究提示卵巢漿液性癌能夠很好的應用二元發(fā)病理論：卵巢低級別漿液性腺癌是由良性→交界性→惡性演變過程而

2、逐步發(fā)展，卵巢高級別漿液性腺癌直接來源于卵巢表面上皮，也有研究提示來源于輸卵管上皮組織。
　　卵巢漿液性腺癌是一種基因疾病，其發(fā)生、發(fā)展的過程基礎是基因的異常，涉及到抑癌基因的失活與癌基因的激活，總體的來說是一種多因素的、多步驟的生物學行為。PHLPP是一種抑癌基因，在許多種腫瘤組織中低表達，如：卵巢癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、惡性膠質(zhì)瘤等。研究發(fā)現(xiàn)， PHLPP通過使PI3K-AKT信號通路中的AKT的疏水基團去磷酸化，使其通路抑制，

3、從而實現(xiàn)對AKT下游的因子的負調(diào)控。Foxo3a作為PI3K-Akt信號通路中的AKT下游重要的信號分子，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。FoxO3a是FOXO家族中的重要一員，通過調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，參與細胞增殖、分化、發(fā)展及血管生成等。FoxO3a廣泛的存在于人體的各個組織，如：結(jié)腸、乳腺、胃、卵巢等組織中。在PI3K-AKT信號通路中被AKT磷酸化后的FoxO3a可通過對下游基因的調(diào)控而促使腫瘤的發(fā)生發(fā)展。RAD51就是 FoxO3

4、a重要的下游分子之一，RAD51基因是 DNA雙鏈斷裂修復基因，其表達的RAD51蛋白是進行同源重組修復的關(guān)鍵酶。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，在許多腫瘤組織（乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌等）RAD51的表達升高，從而導致同源重組的能力增高，使基因的不穩(wěn)定性增加，從而導致細胞重組修復失控、凋亡、基因突變等，和腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。本研究應用免疫組化三步法的研究方法及卵巢二元論模型的理論基礎，檢測在正常卵巢組織、漿液性囊腺瘤（良性）、交界性漿液性腫

5、瘤、卵巢低級別漿液性癌PHLPP、FoxO3a、RAD51的表達，以及在輸卵管組織、卵巢高級別漿液性癌兩組里三者的表達規(guī)律，從而進一步探討卵巢漿液性腺癌高、低兩種不同級別的發(fā)病機制，從而對卵巢漿液性癌的預后和治療方面提供相關(guān)的參考依據(jù)。
　　方法：收集2006年1月至2011年1月河北醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院的婦產(chǎn)科初次進行手術(shù)治療的北方漢族女性，術(shù)前未進行任何的化學及放射治療、均是第一次手術(shù)治療、術(shù)后病理組織證實的、具有完整的臨床資

6、料的臨床病例，共145例，其中卵巢高、低級別漿液性腺癌分別為46例和26例、卵巢漿液性交界性囊腺瘤21例，卵巢漿液性囊腺瘤35例。根據(jù)二元理論，高級別漿液性腺癌起源于卵巢組織，低級別漿液性腺癌起源于輸卵管上皮，故選取正常卵巢組織9例及正常輸卵管組織8例為對照。運用免疫組織化學三步法的實驗方法來檢測正常卵巢組織、卵巢漿液性囊腺瘤、卵巢交界性漿液性囊腺瘤、卵巢低級別漿液性腺癌中，以及輸卵管組織與卵巢高級別漿液性腺癌中，PHLPP、FoxO3

7、a、RAD51的表達情況，在整個實驗過程中嚴格按照免疫組化三步法試劑盒的操作說明書進行，用磷酸鹽緩沖液(PBS）代替一抗作為陰性對照，而陽性對照選擇的是已知的陽性病理切片。統(tǒng)計學處理采用SPSS21.0軟件，采用卡方檢驗來處理計數(shù)資料，Kaplan-Meier單因素分析，繪制相應的生存曲線，計算出生存率；Cox多因素分析各因素對卵巢漿液性腺癌預后的影響；Log-rank檢驗法比較患者的生存率之間是否有差別。檢驗水準α=0.05。

8、　　結(jié)果：
　　1.PHLPP在卵巢漿液性腺癌（不同級別）中的表達及對預后的影響
　　在卵巢漿液性腺癌高級別組、輸卵管組、低級別組、交界性組、囊腺瘤組、正常卵巢組，PHLPP陽性的表達例數(shù)為11/46、6/8、6/26、16/21、32/35、9/9，表達率為23.9%、75.0%、23.1%、76.2%、91.4%、100%。統(tǒng)計分析結(jié)果，高級別組PHLPP陽性的表達率明顯低于輸卵管組，差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

9、低級別組與交界性組、囊腺瘤組和正常卵巢組存在統(tǒng)計學差異（P＜0.05），其余各組間無統(tǒng)計學差異。高級別組和低級別組之間的表達率也無明顯差異（P＞0.05）。
　　在46例高級別組中，PHLPP蛋白表達陰性的3年和5年生存率為32.0%和8.0%；PHLPP蛋白表達陽性的3年和5年生存率為37.5%和12.5%；統(tǒng)計學分析表明PHLPP蛋白陽、陰性表達的3年生存率之間無顯著差異（P＞0.05），其5年生存率也不存在顯著差異（P＞0.

10、05）。在26例低級別組，PHLPP蛋白表達陰性的3年和5年生存率為58.3%和16.7%；PHLPP蛋白表達陽性的3年和5年生存率為80.0%和60.0%；統(tǒng)計學分析表明：低級別中PHLPP蛋白陽、陰性表達者的3年生存率和5年生存率不存在顯著差異（P＞0.05）。
　　2.FoxO3a在卵巢漿液性腺癌（不同級別）中的表達及對預后的影響
　　在卵巢漿液性腺癌高級別組、輸卵管組、低級別組、交界性組、囊腺瘤組、正常卵巢組，F(xiàn)ox

11、O3a陽性的表達例數(shù)為12/46、6/8、7/26、13/21、29/35、9/9，表達率為26.1%、75%、26.9%、61.9%、82.9%、100%。統(tǒng)計分析結(jié)果，F(xiàn)oxO3a蛋白在卵巢漿液性腺癌高級別組的表達顯著低于正常輸卵管組（P＜0.05）。在低級別組的表達率顯著低于交界性組、囊腺瘤組和正常卵巢組，在交界性組的表達率也顯著低于正常卵巢組（P＜0.05）。高級別組和低級別組之間的表達率也無明顯差異（P＞0.05）。
　

12、　FoxO3a在46例高級別組，表達陽性的3年和5年生存率為57.1%和28.6%；FoxO3a表達陰性的3年和5年生存率為26.9%和3.8%；統(tǒng)計分析示，高級別組中FoxO3a陽、陰性的表達者3年的生存率無差異（P＞0.05），F(xiàn)oxO3a表達陽性5年的生存率顯著的高于陰性組（P＜0.05）。在26例低級別組，F(xiàn)oxO3a陽性表達的3年和5年生存率為83.3%和66.7%；FoxO3a陰性表達的3年和5年生存率為55.6%和0%；統(tǒng)

13、計學分析表明，在低級別組中FoxO3a蛋白陽、陰性表達者的3年生存率不存在顯著差異（P＞0.05），F(xiàn)oxO3a表達陽性5年的生存率顯著的高于陰性組（P＜0.05）。
　　3.RAD51在卵巢漿液性腺癌（不同級別）中的表達及對預后的影響
　　在卵巢漿液性腺癌高級別組、輸卵管組、低級別組、交界性組、囊腺瘤組、正常卵巢組，RAD51陽性的表達例數(shù)為33/46、1/8、17/26、10/21、9/35、2/9，表達率為71.7%、

14、12.5%、65.4%、47.6%、25.7%、22.2%。統(tǒng)計分析結(jié)果，RAD51蛋白在高級別組的表達顯著高于正常輸卵管組，差異存在統(tǒng)計學的意義（P＜0.05）。低級別組陽性的表達率顯著低于正常卵巢組和囊腺瘤組（P＜0.05）。高級別組和低級別組之間的表達率無明顯差異（P＞0.05）。
　　RAD51在46例高級別組，表達陽性3年和5年的生存率為25.0%和4.2%；RAD51陰性的3年和5年的生存率是55.6%、22.2%；統(tǒng)

15、計分析示， RAD51陽性的3年生存率和5年生存率均顯著的低于陰性組（P＜0.05）。在26例低級別組，RAD51陽性的3年和5年的生存率為55.7%和11.1%；RAD51陰性的患者的3年和5年的生存率是85.7%、57.1%；統(tǒng)計分析， RAD51陽性與陰性的3年生存率之間無顯著差異（P＞0.05），其5年生存率陰性組明顯高于陽性組（P＜0.05）。
　　4.卵巢漿液性腺癌不同級別的COX多因素生存分析
　　將PHLPP

16、、FoxO3a、RAD51、年齡、轉(zhuǎn)移、臨床分期、化療、多種因素納入卵巢不同級別漿液性腺癌的Cox多因素生存分析，發(fā)現(xiàn)：在卵巢漿液性腺癌高級別組中，術(shù)后化療進入Cox比例風險回歸模型，說明術(shù)后化療是影響高級別組的獨立預后因子。在卵巢漿液性腺癌低級別組中，沒有因素能夠進入Cox比例風險回歸模型。
　　結(jié)論：
　　1.卵巢漿液性腺癌高級別組PHLPP、FoxO3a蛋白的表達降低，而RAD51蛋白的表達升高，提示三種基因可能參與了

17、卵巢高級別漿液性腺癌的發(fā)生。
　　2.卵巢漿液性腺癌（低級別）、漿液性囊腺瘤（交界性）、漿液性囊腺瘤（良性組）、正常卵巢組織中PHLPP、FoxO3a蛋白的表達逐漸升高，而RAD51蛋白的表達逐漸降低，三者可能參與卵巢漿液性腺癌（低級別）發(fā)病的過程。
　　3.PHLPP、FoxO3a、RAD51三種蛋白在卵巢漿液性腺癌低、高級別組中的表達無顯著差異，說明卵巢不同級別的漿液性腺癌的發(fā)生可能存在許多共同分子基礎。
　　4.