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文檔簡介
1、款冬花具有止咳化痰作用,為中醫(yī)臨床常用藥材,歐洲國家則用款冬葉子代替款冬花發(fā)揮藥效。從藥用資源的角度來看,葉具有產(chǎn)量高且易采收的優(yōu)勢。中醫(yī)具有豐富的科學(xué)內(nèi)涵,臨床用藥的主要特點(diǎn)是配伍取效,《本草經(jīng)集注》、《千金》卷十八、《太平圣惠方》卷八十三、《御藥院方》卷五等均為款冬花、紫菀相須使用。為了便于研究本文選擇款冬、紫菀藥對組成的小復(fù)方。前期課題組研究比較了款冬花、葉配伍紫菀散的藥理活性。本課題繼續(xù)深入比較,為款冬葉能否入藥提供依據(jù)。
2、> 目的:探明款冬花、葉配伍紫菀散在毒性、化學(xué)成分、體內(nèi)代謝的差異,綜合比較,為款冬葉資源的合理利用奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。
方法:款冬花、葉配伍紫菀散的毒性比較:本文以款冬花、葉、紫菀為實(shí)驗(yàn)材料,采用小鼠實(shí)驗(yàn)、斑馬魚實(shí)驗(yàn)對款冬花、葉配伍紫菀散進(jìn)行毒性比較,通過生化指標(biāo)、病理切片、核磁代謝組學(xué)技術(shù)找到病變部位及相關(guān)代謝物;款冬花、葉配伍紫菀散化學(xué)比較:采用高分辨液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對款冬花、葉及配伍紫菀散進(jìn)行了研究,采用靶標(biāo)和非靶標(biāo)結(jié)合的指認(rèn)
3、策略進(jìn)行化合物鑒定,多元統(tǒng)計(jì)和單變量積分方法進(jìn)行化學(xué)比較;款冬花、葉配伍紫菀散的藥物代謝比較:用高分辨液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測款冬花、葉配伍紫菀散給藥后,大鼠血清所含藥物化學(xué)成分,并對檢測的藥物及其代謝物做半定量分析,尋找二者的差異。
結(jié)果:(1)款冬花和葉分別配伍紫菀散的毒性比較。病理切片和生化指標(biāo)均顯示給藥組小鼠的肝臟發(fā)生了明顯病變,血液和肝臟代謝組學(xué)分析共鑒定15個(gè)毒性相關(guān)的生物標(biāo)志物,涉及氨基酸、脂質(zhì)、嘌呤代謝異常、能量代謝失
4、衡和氧化損傷等病理過程。從本研究所檢測到的內(nèi)源性代謝物的變化程度來看,款冬花復(fù)方給藥后血液中3-HB、丙氨酸、乙酰乙酸鹽以及肝臟中乳酸、醋酸鹽、黃嘌呤等代謝物的變化更大,而款冬葉復(fù)方給藥后血液中纈氨酸、脂質(zhì)、谷氨酸、甘油以及肝臟中琥珀酸、鯊肌醇等代謝物的變化更大。綜合這些代謝物的變化來看,大劑量分別給予花、葉組成的紫菀散復(fù)方對肝臟的毒性影響雖然有所不同,但在毒性強(qiáng)度差異無顯著區(qū)別??疃?、葉、花配伍紫菀散、葉配伍紫菀散處理斑馬魚幼魚72
5、 h后,0.5 mg/mL濃度下,斑馬魚無肝臟毒性;1.0 mg/mL濃度下,各樣品均導(dǎo)致斑馬魚肝臟熒光面積減小,但各樣品組間差異不顯著;1.5 mg/mL濃度下,款冬花樣品導(dǎo)致斑馬魚肝臟熒光面積減小程度較款冬葉樣品大,但是各樣品處理組幼魚ALT、AST與空白對照組相比均無顯著差異。因此,款冬花、葉、花配伍紫菀散、葉配伍紫菀散在藥物濃度較高時(shí),均顯示肝毒性,但是各組間沒有顯著差異。尿蛋白檢測結(jié)果顯示4個(gè)受試樣品未對斑馬魚腎臟產(chǎn)生毒性影響
6、。
?。?)款冬花、葉的化學(xué)比較。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對款冬花、葉化學(xué)成分比較研究。與本課題組前期研究相比,液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可以更加靈敏的檢測款冬中的次級代謝產(chǎn)物。本研究采用靶標(biāo)和非靶標(biāo)結(jié)合的指認(rèn)策略,結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道、標(biāo)品比對及軟件識別和數(shù)據(jù)庫關(guān)聯(lián),大大提高了指認(rèn)效率。一共指認(rèn)了款冬中43種化學(xué)成分。研究結(jié)果顯示,款冬酮、款冬花素酯等倍半萜類物質(zhì)在花中的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于葉;黃酮類物質(zhì)金絲桃苷、槲皮素在款冬花和葉中含量接近,蘆丁、山柰酚在款冬花中含
7、量高;苯丙素類物質(zhì),綠原酸、異綠原酸等在葉中的含量高于花中的含量,與之前研究結(jié)果一致。
?。?)款冬花、葉配伍紫菀散水提物化學(xué)成分分析。通過液質(zhì)聯(lián)用共指認(rèn)了39種化合物,花配伍紫菀散中含量較高的化合物有黃酮類物質(zhì)蘆丁、山奈酚,倍半萜類物質(zhì)款冬素酯,其它類物質(zhì)纈氨酸、蘋果酸等;葉配伍紫菀散中苯丙素類物質(zhì)綠原酸、隱綠原酸、新綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸C、異阿魏酸、阿魏酸略高于花復(fù)方,黃酮類物質(zhì)金絲桃苷、槲皮素、山奈酚-3-蕓香糖苷
8、、山奈酚-3-O-葡萄糖苷,生物堿類腎形千里光堿、腎形千里光寧的含量顯著高于花配伍紫菀散;其它化合物如腺苷、苯丙氨酸等在葉復(fù)方中含量較高。
(4)款冬花、葉配伍紫菀散的藥物代謝比較。采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測體內(nèi)藥物化學(xué)成分,先單獨(dú)做全掃描,然后做批量的靶標(biāo)掃描。在15 min檢測到綠原酸、咖啡酸、二氫咖啡酸葡萄糖醛酸酯,咖啡酸硫酸酯,槲皮素-glc-SO3產(chǎn)物。其中二氫咖啡酸葡萄糖醛酸酯在花配伍紫菀散中含量較高,咖啡酸含量在兩組中
9、相近,其余3種均在葉配伍紫菀散中含量高。在60 min時(shí)檢測到腎形千里光堿、千里光寧、山奈酚二葡萄糖醛酸酯、款冬酮一羥基取代物、AstertaroneB-SO3產(chǎn)物。其中款冬酮一羥基取代物在花配伍紫菀散中含量較高,山奈酚二葡萄糖醛酸酯僅存在于花配伍紫菀散中,AstertaroneB-SO3產(chǎn)物在兩組中相近,2個(gè)生物堿則在葉配伍紫菀散中含量較高,和體外檢測結(jié)果一致。
結(jié)論:本文通過比較款冬花、葉配伍紫菀散的毒性、化學(xué)、藥物代謝等
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