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1、端粒酶通過催化端粒合成,保持端粒長度,從而保證細胞的持續(xù)分裂能力,其活性與細胞永生化、腫瘤發(fā)生等過程密切相關(guān).各種生物中端粒酶均至少由三個單位構(gòu)成,即RNA模板TR、逆轉(zhuǎn)錄催化亞單位TERT和相關(guān)蛋白TLP等.人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄催化亞單位hTERT的mRNA表達水平與端粒酶的活性有非常明顯的一致性,表明hTERT的轉(zhuǎn)錄調(diào)控是端粒酶活性調(diào)節(jié)中的限速步驟.hTERT的啟動子已經(jīng)被克隆,其主要調(diào)節(jié)區(qū)為結(jié)構(gòu)簡單的看家基因類啟動子:無典型的TATA-
2、box結(jié)構(gòu),富含GC,具有多個Sp1結(jié)合位點.近年來已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多參與hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的相關(guān)因子,其中對c-Myc的研究最為充分,Sp1和雌激素也有所涉及.另外,p53、WT1、MZF-2和Mad是已知的對hTERT的轉(zhuǎn)錄起抑制作用的因子.但是,腫瘤細胞中hTERT基因表達的詳細情形仍不明了.為了分離和克隆參與hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子,分析其調(diào)控的分子機制,并鑒定其對HeLa細胞端粒酶活性的生物學(xué)效應(yīng),該研究進行了下列實驗:1、參
3、與端粒酶催化亞基hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子的分離和克隆.2、COUP-TFII融合蛋白的原核表達和純化.3、COUP-TFII融合蛋白與hTERT基因啟動子的相互作用.四、COUP-TFII在HeLa細胞中對hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響.該研究表明,COUP-TFII作為一個轉(zhuǎn)錄抑制因子,通過與hTERT基因啟動子相互作用,和c-Myc競爭結(jié)合E-box元件,降低人端粒酶催化亞基hTERT的轉(zhuǎn)錄并相應(yīng)抑制HeLa細胞端粒酶活性.初步揭示了
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