破血化瘀法對氯化鋁誘導(dǎo)的體外神經(jīng)細(xì)胞凋亡模型神經(jīng)保護(hù)作用的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗采用體外培養(yǎng)的原代神經(jīng)元研究破血化瘀法對氯化鋁凋亡模型的保護(hù)作用，為破血化瘀法治療腦出血提供理論依據(jù)。
　　方法：體外分離培養(yǎng)原代神經(jīng)元細(xì)胞。采用CCK-8法測定其生長曲線；應(yīng)用不同濃度的氯化鋁作用于細(xì)胞，通過CCK-8法檢測細(xì)胞存活率，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率，從而建立氯化鋁凋亡模型；應(yīng)用破血化瘀發(fā)指導(dǎo)下的不同藥物含藥血清對氯化鋁凋亡模型進(jìn)行干預(yù)，用CCK-8法檢測細(xì)胞存活率。應(yīng)用graphpad Prism5進(jìn)

2、行繪制及分析。均進(jìn)行兩獨立樣本t檢驗與方差分析，實驗結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。
　　結(jié)果：1、取孕18d大鼠胎鼠應(yīng)用2次消化法提取神經(jīng)元細(xì)胞并應(yīng)用 B27和neurobasal無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)，用 NSE免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，陽性率達(dá)95％以上（95±2.04%）。2、低濃度的氯化鋁即可以對神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生損傷，其損傷程度隨氯化鋁的濃度及作用時間成正比，從0.8mmol/L氯化鋁時開始具有顯著性差異（P<0.01），并于1 m

3、mol/L時存在極顯著差異（P<0.001）；0.5mmol/L、1mmol/L、1.5mmol/L均可引起神經(jīng)元凋亡，但2mmol/L是細(xì)胞壞死率嚴(yán)重升高。3、2.5%抵擋湯含藥血清組、5%生理鹽水血清組、5%血塞通含藥血清組與造模組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），5%抵擋湯含藥血清組和5%腦血康含藥血清組有顯著性差異（P<0.01），10%抵擋湯含藥血清組有極顯著差異（（P<0.001），這說明與造模組相比，5%抵擋湯含藥血清和

4、5%腦血康含藥血清能夠減輕氯化鋁誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷，并且隨著抵擋湯含藥血清濃度升高對減輕細(xì)胞損傷的效果升高。
　　結(jié)論：1、用孕18d大鼠胎鼠進(jìn)行2次消化法提取神經(jīng)元細(xì)胞并應(yīng)用 B27和neurobasal無血清培養(yǎng)液可以提取高純度的神經(jīng)元，并可以用于相關(guān)實驗。2、原代體外培養(yǎng)的神經(jīng)元細(xì)胞對氯化鋁的神經(jīng)毒性較為敏感，0-2mmol/L的氯化鋁即可對其造成損傷。3、氯化鋁造成的細(xì)胞存活率降低與細(xì)胞凋亡有關(guān)。低濃度的氯化鋁即可引起神經(jīng)元細(xì)