人TCP11a、ZNF313基因在大腸桿菌中的蛋白表達及其在小鼠和人睪丸中的免疫組織化學(xué)分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了在蛋白質(zhì)水平研究這些基因在睪丸組織的表達情況,我們將TCP11基因和ZNF313基因克隆到大腸桿菌中進行表達,并利用表達的蛋白制備抗體,進行組織化學(xué)分析,以期了解這些基因在睪丸組織中的表達狀態(tài),對其功能進行進行推測.第一部分:人受精促進肽受體TCP11a基因的蛋白表達及細(xì)胞組織分布 人TCP11基因編碼人受精促進肽受體,該基因存在多個剪切體.我們選擇剪切體TCP11a基因進行表達,制備抗體以研究TCP11蛋白在睪丸及精細(xì)胞上的分布.

2、通過PCR等分子克隆技術(shù),我們將TCP11a基因克隆到pBV220表達載體上,通過DNA測序及表達產(chǎn)物的N-端測定證實了克隆基因表達產(chǎn)物的正確性.然后我們還對工程菌TCP11a蛋白的表達條件進行了研究,使TCP11a蛋白在工程菌中高效表達.并利用表達蛋白制備的抗體進行了組織化學(xué)分析.在上述工作基礎(chǔ)上,運用生物信息分析方法,對TCP11基因及TCP11a蛋白進行了深入分析.第二部分:人精子發(fā)生相關(guān)基因——ZNF313在大腸桿菌中的克隆表達

3、及組織分布 鋅指蛋白是一類廣泛存在于動植物及人類的DNA結(jié)合蛋白.由于能選擇性地結(jié)合各種DNA和RNA序列,它們在基因的表達調(diào)控中起著十分重要的作用.C2H2和C3HC4鋅指是較為常見的兩種鋅指結(jié)構(gòu)域,但很少同時存在于同一個鋅指蛋白.而我們克隆表達的ZNF313蛋白卻同時含有這兩種結(jié)構(gòu)域.利用PCR方法,將人ZNF313基因克隆到pET-32(a)載體上,使之以融合蛋白形式表達.在DNA序列測定、蛋白N-端序列測定證實了克隆表達的正確性

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