縫隙連接在鎘致BRL 3A細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、縫隙連接(GJ)介導(dǎo)相鄰細(xì)胞間的物質(zhì)交換和信息交流，在調(diào)控細(xì)胞生長、增殖、轉(zhuǎn)化和凋亡的穩(wěn)態(tài)平衡中起著重要作用。鎘是一種重要的工業(yè)和環(huán)境污染物，可誘導(dǎo)多種細(xì)胞凋亡。為探討鎘對大鼠肝細(xì)胞(BRL3A)縫隙連接通訊功能的影響及縫隙連接在鎘致BRL3A細(xì)胞凋亡中的作用，本實驗以不同濃度的醋酸鎘（0、2.5、10μmol/L）作用BRL3A細(xì)胞12h或10μmol/L醋酸鎘、5μmol/L18β-甘草次酸(18β-glycyrrhizic aci

2、d，GA)單獨或聯(lián)合作用細(xì)胞9h，采用實時分析技術(shù)(RTCA)測定細(xì)胞指數(shù)(CI)，顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，劃痕染料標(biāo)記示蹤法(SL/DT)檢測細(xì)胞縫隙連接通訊(GJIC)，激光共聚焦觀察縫隙連接蛋白Cx43分布，hoechst33258染核，流式細(xì)胞術(shù)測定胞內(nèi)Ca2+濃度([Ca2+]i)和細(xì)胞凋亡率，免疫印跡測定Cx32、Cx43、p-Cx43、Bax、Bcl-2、caspase-3和MAPK成員ERK、JNK和p38的活化。
　

3、　結(jié)果表明:①0、2.5、10μmol/L鎘暴露12h后，CI值顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），細(xì)胞間熒光黃(LY)兩側(cè)擴散距離極顯著減少（P＜0.01），Cx43在細(xì)胞膜上分布減少、胞內(nèi)增多，Cx32、Cx43和p-Cx43表達(dá)顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。②10μmol/L鎘暴露9h后，LY兩側(cè)擴散距離明顯減少，Cx32表達(dá)無顯著變化(P＞0.05)，Cx43表達(dá)極顯著降低(P＜0.01)，p-Cx

4、43表達(dá)極顯著升高(P＜0.01)，胞內(nèi)Ca2+濃度([Ca2+]i)極顯著升高(P＜0.01)?？p隙連接阻滯劑(GA)和鎘聯(lián)合作用對鎘引起的Cx32、Cx43和p-Cx43表達(dá)變化無明顯影響（P＞0.05），但能增強鎘引起的[Ca2+]i的升高(P＜0.01)。③10μmol/L鎘暴露9h后，可引起B(yǎng)RL3A細(xì)胞核形態(tài)的變化，出現(xiàn)核皺縮、核碎裂等典型的凋亡特征，并增加肝細(xì)胞的凋亡率。GA和鎘聯(lián)合作用可增強鎘誘導(dǎo)的胞核形態(tài)的改變、細(xì)胞凋

5、亡率升高和Bax/Bcl-2比值和cleaved caspase-3/procaspase-3比值升高(P＜0.05或P＜0.01)。鎘可誘導(dǎo)ERK、JNK和p38的磷酸化水平極顯著上升（P＜0.01）。GA和鎘聯(lián)合作用能極顯著增加鎘引起的ERK和p38磷酸化水平的升高（P＜0.01），但對JNK的磷酸化水平無顯著影響(P＞0.05)。
　　結(jié)論，鎘對BRL3A細(xì)胞有明顯的細(xì)胞毒性，可抑制GJIC，其機制可能是鎘誘導(dǎo)BRL3A細(xì)胞