膈下逐瘀湯逆轉裸鼠移植瘤MDR-1的實驗研究及逆轉復發(fā)轉移大腸癌MDR-1的臨床研究.pdf

1、目的:
　　 (1)建立耐藥性穩(wěn)定的耐5-FU人結腸癌細胞株HCT-8/5-FU裸鼠移植瘤動物模型，探討膈下逐瘀湯逆轉裸鼠移植瘤MDR-1基因的表達;(2)研究膈下逐瘀湯對復發(fā)、轉移大腸癌患者MDR-1基因表達的臨床研究，為逆轉腫瘤耐藥的研究提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 (1)體外常規(guī)培養(yǎng)HCT-8、HCT-8/5-FU細胞，MTT法檢測HCT-8、HCT-8/5-FU腫瘤細胞對四類作用機制不同的化療藥物的

2、耐藥性(5-FU、VCR、VP-16、DDP)。取對數(shù)生長期細胞HCT-8、HCT-8/5-FU接種子裸鼠右腋下，待瘤體平均體積至100mm3，將已成瘤并維持耐藥性的裸鼠隨機分為四組:對照組、膈下逐瘀湯組、5-FU組、膈下逐瘀湯+5-FU組。每隔2天測量腫瘤最長徑(a)及最短徑(b)，計算腫瘤體積;連續(xù)給藥14天后，處死裸鼠，取瘤組織，稱瘤重。RT-PCR分別檢測瘤組織內(nèi)MDR-1 mRNA表達。
　　 (2)采用隨機對照實驗研

3、究方法將50例符合納入標準的復發(fā)、轉移的晚期大腸癌患者分為2組，一組予FOLFOX4方案化療（單純化療對照組）4周期，一組FOLFOX4方案化療加膈下逐瘀湯（治療組）4周期。分別在化療前及化療后采集外周血2mL。RT-PCR法，檢測外周血MDR-1 mRNA表達。結果在SPSS16.0軟件中進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果:
　　 1.MTT法檢測人結腸腺癌細胞HCT-8/5-FU對5-FU、DDP、VCR、VP-16的耐藥

4、倍數(shù)為120.94±6.93、11.47±0.13、11.74±0.21、21.11±0.60。差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，表明耐藥細胞對其他機制不同、結構各異的化療藥均有不同程度交叉耐藥性。取HCT-8、HCT-8/5-FU兩組瘤組織檢測其耐藥性，結果5-FU對HCT-8、HCT-8/5-FU兩組瘤組織的IC50分別為0.26±0.12umol/L、26.56±0.23 umol/L，耐藥倍數(shù)為98.30±3.56，較體外細胞培

5、養(yǎng)耐藥倍數(shù)略有下降，但仍保持著良好的耐藥性。
　　 2.人結腸腺癌HCT-8移植瘤成瘤率為71.42％(5/7)，而HCT-8/5-FU耐藥細胞成瘤率為88.23％(30/34)，耐藥細胞與敏感細胞成瘤率無明顯差別(P＞0.05)。
　　 3.根據(jù)移植瘤體積生長曲線大體表明，膈下逐瘀湯組、5-FU聯(lián)合膈下逐瘀湯組瘤體生長速度慢于空白對照組和5-FU組，5-FU聯(lián)合膈下逐瘀湯組與空白對照組相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05

6、）。5-FU聯(lián)合膈下逐瘀湯組、膈下逐瘀湯組、5-FU組對裸鼠移植瘤的抑瘤率分別為18.0％、9.6％和7.0％，瘤體重量分別為（2.88±0.31）g、（3.17±0.53）g和（3.26±0.26）g，統(tǒng)計結果顯示5-FU聯(lián)合膈下逐瘀湯組抑瘤率明顯低于空白對照組(P＜0.03)，提示兩藥聯(lián)合對裸鼠移植瘤的生長具有明顯抑制作用。但單藥5-FU組、膈下逐瘀湯與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義，考慮與藥物干預時間不足有關(P＞0.05)。

7、r>　　 4.膈下逐瘀湯組MDR1mRNA的表達水平較對照組顯著下調(diào)，聯(lián)合用藥組MDR1mRNA的表達水平下調(diào)更為明顯，與對照組比較差異有顯著性(P＜0.05)。5-FU組MDR1mRNA的表達與對照組比較無差異(P＞0.05)。結果表明膈下逐瘀湯具有逆轉裸鼠移植瘤MDR-1基因的表達。
　　 6.單純化療組化療前外周血的MDR1陽性表達是76％，化療后MDR1陽性表達是84％，化療后較化療前增高，表明化療后復發(fā)轉移的大腸癌患

8、者的MDR1表達有增高趨勢，提示存在化療后的獲得性繼發(fā)耐藥。
　　 7.中藥聯(lián)合化療組化療前外周血的MDR1表達是68％，化療后MDR1表達是40％，化療較化療前降低，MDR1表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，表明膈下逐瘀湯具有逆轉腫瘤原發(fā)耐藥和繼發(fā)耐藥有關。
　　 結論:
　　 1.腫瘤細胞對一種化療藥物產(chǎn)生耐藥性后，對從未接觸過的、結構機制不同的多種抗腫瘤藥物也具有交叉耐藥性;
　　 2.人結腸腺

9、癌HCT-8/5-FU皮下移植是建立多藥耐藥裸鼠移植瘤的良好方法，具有操作簡單、成瘤率較高、耐藥特性穩(wěn)定等優(yōu)點;
　　 3.膈下逐瘀湯可逆轉裸鼠移植瘤多藥耐藥，其機制可能為通過下調(diào)MDR-1基因表達達到逆轉效果;
　　 4.反復多程化療后外周血MDR-1 mRNA表達升高，惡性腫瘤的耐藥性增加，可能與化療后獲得性繼發(fā)耐藥有關;
　　 5.膈下逐瘀湯能夠降低復發(fā)轉移大腸癌患者多藥耐藥基因MDR-1的表達，聯(lián)合膈下逐