河豚毒素的中毒、檢測及評價.pdf

1、河豚魚肉質(zhì)鮮美,營養(yǎng)豐富,自古以來亞洲的一些國家如中國、日本等便有食用河豚的習俗。由于河豚魚含有劇毒物質(zhì)河豚毒素(tetrodotoxin,簡稱TTX),因此食用河豚中毒的事件屢有發(fā)生。據(jù)報道日本每年食用河豚中毒死亡人數(shù)占同期食物中毒死亡人數(shù)的70％以上。我國幅員遼闊,有著大量的河豚資源,因此在沿海地區(qū)食用河豚中毒的情況相當嚴重。由于TTX的相關(guān)基礎(chǔ)性研究相對滯后,檢測技術(shù)難以滿足體內(nèi)痕量TTX的檢測要求,使得涉及TTX中毒的法醫(yī)學鑒定

2、、臨床診斷救治以及食品安全的監(jiān)控難以進行。本文旨在構(gòu)建“高效、靈敏、準確”的分析策略,建立基于固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測生物檢材中的河豚毒素的方法,并將其應(yīng)用到實際生物樣品的分析中,為河豚毒素中毒的法醫(yī)學鑒定、臨床診治以及食品安全的監(jiān)控提供技術(shù)保障。本研究分為五個部分：
　　 第一章綜述了TTX的研究現(xiàn)狀。對TTX的特點、應(yīng)用、檢測技術(shù)等進行了介紹。著重討論了TTX目前常用的檢測技術(shù)。立足檢測方法的建立、完善、優(yōu)化并以之

3、為出發(fā)點,提出了本論文的研究內(nèi)容。
　　 第二章建立了血液、尿液以及肝中TFX的固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(SPE-LC-MS／MS)的檢測方法,并進行了全面系統(tǒng)的方法學驗證。血液、尿液和肝中TTX檢出限分別為2ng.mL-1、2ng-mL-1和4ng·mL-1,定量下限均在5 ng·mL(g)-1以下,在5～100 ng·mL(g)-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)r≥0.9973；日內(nèi)精密度和日間精密度均在12.80％以

4、內(nèi)；回收率大于47.2％。該方法為河豚毒素中毒的法醫(yī)學鑒定、臨床診治以及食品安全的監(jiān)控提供了新的借鑒。
　　 第三章建立了河豚毒素中毒動物實驗?zāi)Ｐ?通過動物實驗,觀察中毒癥狀以及變化,運用LC-MS／MS的檢測方法,檢測中毒豚鼠中體液和組織中TTX的含量并研究其體內(nèi)分布。結(jié)果表明在高劑量組中肺和血液中可以檢測到較高含量的TTX,在中劑量組中,尿液和肺中可以檢材到較高含量的TTX,而在低劑量組中,尿液可以檢測到TTX。這為法醫(yī)學鑒

5、定中河豚毒素中毒案件的評價提供了理論依據(jù)。同時,在此基礎(chǔ)之上,利用高分辨質(zhì)譜(LTQ-Orbitrap)技術(shù),對可能存在的TTX代謝物進行了探索尋找。
　　 第四章建立了魚片干中河豚毒素的檢測方法,通過動物實驗研究,對某品牌的魚片干中所含TTX的含量進行檢測及評價。另一方面,基于本研究中對魚片干進行烘烤的處理方法,對脫水河豚毒素進行了檢測和表征。
　　 第五章總結(jié)了本論文的成果與創(chuàng)新點,并提出進一步的研究方向。
　

6、　 本研究所建立的檢測生物檢材中TTX的方法可以適用于全血、尿液、肝等檢材,也適用于鮮河豚魚以及經(jīng)過烘烤加工過的魚干等樣品。所建方法的靈敏度、準確度等均可以滿足食品安全監(jiān)測、臨床救治以及法醫(yī)學檢驗和司法鑒定實踐中的各種需要。目前,該方法已運用于實際檢案。在進行動物實驗研究的過程中,首次采用了灌胃的給藥方式,對TTX在動物體內(nèi)的分布做了全面的定性定量檢測,對比了各組織體液中的分布情況,為各類涉及到TTX中毒引起的案件的取材提供了理論依據(jù)