Vigilin及ILF3在雌激素信號(hào)傳導(dǎo)中的功能研究.pdf

1、雌激素在體內(nèi)的生理作用通過雌激素受體(EstrogenReceptor，ER)ERβ和ERα的介導(dǎo)來實(shí)現(xiàn)調(diào)控。雌激素受體在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有分布。研究表明ERa能刺激細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)，ERβ能拮抗ERα的活性。ERβ在乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、和卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程中具有調(diào)控作用。文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)RNA的3’非翻譯區(qū)（3'UTR）序列異常容易導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。mRNA的3'UTR有許多調(diào)控元件能調(diào)控mRNA的翻譯，mRNA的穩(wěn)定性及在細(xì)胞中的

2、定位。這些調(diào)控元件能與蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合。mRNA3’UTR通過RNA結(jié)合蛋白和microRNA來實(shí)現(xiàn)其對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。我們以ERβmRNA3'UTR為研究對(duì)象，探索真核生物mRNA非翻譯區(qū)的調(diào)控機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)前期通過RNA沉降技術(shù)得到兩種與ERpmRNA3'UTR特異性結(jié)合的蛋白:Vigilin和ILF3。Vigilin是一個(gè)高度保守的，含有14個(gè)RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（KH結(jié)構(gòu)域）的蛋白。ILF3是RNA結(jié)合蛋白中的一員，能與富含A

3、U序列的mRNA結(jié)合，調(diào)控基因表達(dá)。Vigilin和ILF3蛋白都參與基因調(diào)控，如RNA轉(zhuǎn)錄、RNA剪切、RNA編輯、RNA出核轉(zhuǎn)運(yùn)等。研究Vigilin、ILF3和ERβ的調(diào)控關(guān)系對(duì)了解ERβmRNA3'UTR在雌激素信號(hào)傳導(dǎo)途徑的作用機(jī)制有重要的意義。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)(EMSA)和Dual-Iuciferase實(shí)驗(yàn)證明了Vigilin和ILF3能特異的結(jié)合于ERpmRNA3'UTR。雌激素受體可介導(dǎo)雌激素實(shí)現(xiàn)其

4、功能，Vigilin和ILF3蛋白可能通過與ERβ結(jié)合，參與雌激素信號(hào)通路的調(diào)控。為探討他們與雌激素受體的關(guān)系以及調(diào)控機(jī)制，我們構(gòu)建Vigilin過表達(dá)和低表達(dá)的細(xì)胞穩(wěn)定株，ILF3過表達(dá)的細(xì)胞株穩(wěn)定株，通過WestemBlot檢測(cè)ERβ蛋白的表達(dá)情況。在蛋白水平上，ERβ蛋白的表達(dá)量隨著Vigilin蛋白量的升高而降低，當(dāng)Vigilin表達(dá)被抑制時(shí)，ERβ的表達(dá)量升高。Vigilin蛋白對(duì)ERβ基因的表達(dá)起負(fù)調(diào)控作用，對(duì)Erα基因的表