丙酮醛聯(lián)合乙二醛酶I低表達(dá)介導(dǎo)STAT1信號(hào)通路協(xié)同抑制結(jié)直腸癌的生長(zhǎng).pdf

1、目的：
　　丙酮醛（Methylglyoxal, MG）是糖酵解過程中產(chǎn)生的具有極高生物活性的二羰基化合物，其具有抗腫瘤活性。乙二醛酶I（Glyoxalase I, GLOI）是MG代謝過程中的關(guān)鍵酶，參與腫瘤的發(fā)展。GLOI在多種類型的腫瘤組織中的表達(dá)量明顯高于正常組織。MG或 GLOI在多種腫瘤中的作用已經(jīng)被證實(shí)，但 MG聯(lián)合GLOI低表達(dá)在結(jié)直腸癌中的作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬從體內(nèi)外探究 MG聯(lián)合GLOI低表達(dá)在結(jié)直腸癌中的作

2、用以及其潛在的作用機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　本實(shí)驗(yàn)中我們首先建立GLOI穩(wěn)定低表達(dá)的結(jié)直腸癌細(xì)胞系。然后利用不同濃度的MG（0.4 mmol/L、0.8 mmol/L）處理對(duì)照組和GLOI低表達(dá)組的四種結(jié)直腸癌細(xì)胞（DLD-1細(xì)胞、HCT-15細(xì)胞、SW480細(xì)胞及 SW620細(xì)胞）。利用CCK-8實(shí)驗(yàn)和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)四種結(jié)直腸癌的細(xì)胞活力和克隆形成能力；利用 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移和侵襲的

3、變化情況；利用Annexin V-APC、PI熒光雙染法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的變化情況；利用Western blot檢測(cè)GLOI及STAT1信號(hào)通路相關(guān)蛋白的變化情況；利用q-PCR和GLOI酶活性檢測(cè)試劑盒（Quanti ChromTMGlyoxalase I Assay Kit）分別檢測(cè)GLOI的mRNA和酶活性的變化情況。我們通過建立裸鼠人結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620皮下移植瘤模型研究 MG和 GLOI低表達(dá)在體內(nèi)對(duì)結(jié)直腸癌的

4、影響，利用 MG酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi) MG和裸鼠外周血中的MG的含量，利用免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤組織中STAT1蛋白的變化情況。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　成功構(gòu)建GLOI低表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株。與對(duì)照組相比，MG聯(lián)合GLOI低表達(dá)協(xié)同抑制結(jié)直腸細(xì)胞的增殖、平板克隆形成、遷移、侵襲能力并能協(xié)同誘導(dǎo)結(jié)直腸細(xì)胞凋亡。MG和GLOI低表達(dá)單獨(dú)或者聯(lián)合后能上調(diào)STAT1和Bax蛋白水平，下調(diào)Bcl-2蛋白水平。進(jìn)一步研究表明，MG和GLO