高仿真殼聚糖神經(jīng)支架的制備及其橋接神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、周圍神經(jīng)缺損是平時(shí)與戰(zhàn)時(shí)最常見(jiàn)的創(chuàng)傷類型之一，常導(dǎo)致患者感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)功能喪失，是目前尚未解決的臨床難題之一。自體神經(jīng)移植是治療周圍神經(jīng)缺損的金標(biāo)準(zhǔn)，主要優(yōu)勢(shì)是其修復(fù)效果明確，但供體來(lái)源有限、供區(qū)功能損害以及供體和受體神經(jīng)尺寸和類型不匹配等原因限制了自體神經(jīng)移植的應(yīng)用。組織工程學(xué)的發(fā)展為神經(jīng)缺損的治療帶來(lái)了希望。目前已經(jīng)有各種超微結(jié)構(gòu)的神經(jīng)支架被相繼開(kāi)發(fā)，并被嘗試應(yīng)用于神經(jīng)缺損的治療之中，但可惜的是其在體修復(fù)效果均不甚理想，主要的原因之一是

2、神經(jīng)支架的內(nèi)部結(jié)構(gòu)與正常神經(jīng)的超微結(jié)構(gòu)相差較大。目前國(guó)際公認(rèn)的最理想的神經(jīng)支架應(yīng)該具有與正常神經(jīng)基底膜高度仿真的軸向微管樣結(jié)構(gòu)。鑒于此，本研究以殼聚糖為主要原料，通過(guò)前期已獲國(guó)家發(fā)明專利的梯度冷淋技術(shù)，成功構(gòu)建了高仿真神經(jīng)支架，并在大鼠坐骨神經(jīng)缺損模型中，從形態(tài)學(xué)和功能學(xué)兩方面將高仿真支架與自體神經(jīng)移植進(jìn)行對(duì)比，綜合評(píng)估其修復(fù)效果。全文共分為三部分：
　　第一部分：高仿真殼聚糖支架材料的制備
　　目的：構(gòu)建在超微結(jié)構(gòu)上與正常

3、神經(jīng)基底膜結(jié)構(gòu)高度仿真的組織工程神經(jīng)支架。
　　方法：以殼聚糖為原料，應(yīng)用改良的梯度冷淋技術(shù)制備高仿真神經(jīng)支架，掃描電鏡觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)制備的殼聚糖神經(jīng)支架在縱截面上為相互平行的微管樣結(jié)構(gòu)，微管相對(duì)均一，管徑為54.26±12.1μm（范圍：45～75μm）；神經(jīng)支架的橫截面類似于蜂窩樣結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)論：利用前期開(kāi)發(fā)的梯度冷淋技術(shù)制備的神經(jīng)支架的超微結(jié)構(gòu)高度仿真于正常神經(jīng)的基底膜結(jié)構(gòu)，有望成為神經(jīng)缺損

4、修復(fù)中自體神經(jīng)的替代物。
　　第二部分：高仿真殼聚糖支架的基本性能測(cè)定
　　目的：對(duì)殼聚糖支架的性能進(jìn)行優(yōu)化和改進(jìn)，并測(cè)定殼聚糖支架的相關(guān)特征和參數(shù)。
　　方法：測(cè)定殼聚糖支架的孔隙率、表觀密度，在此基礎(chǔ)上利用京尼平（genipin）對(duì)殼聚糖支架進(jìn)行交聯(lián)，確定殼聚糖材料的交聯(lián)度與交聯(lián)時(shí)間以及交聯(lián)劑濃度的關(guān)系，同時(shí)評(píng)價(jià)交聯(lián)后殼聚糖材料的細(xì)胞相容性，對(duì)比殼聚糖支架交聯(lián)前后的降解性以及力學(xué)性能，以全面了解高仿真殼聚糖神經(jīng)支架

5、的基本性能。
　　結(jié)果：殼聚糖神經(jīng)支架的孔隙率為85.13±2.89％，表觀密度為0.0623±0.0242mg/mm3；應(yīng)用京尼平交聯(lián)殼聚糖材料，材料的交聯(lián)度隨交聯(lián)時(shí)間延長(zhǎng)而增加，隨交聯(lián)劑濃度增大而增加。此外，殼聚糖支架經(jīng)京尼平交聯(lián)后，降解性以及力學(xué)強(qiáng)度有了明顯改善，同時(shí)交聯(lián)后的材料具有良好的細(xì)胞相容性，可以滿足在體修復(fù)神經(jīng)缺損的要求。
　　結(jié)論：殼聚糖支架經(jīng)京尼平交聯(lián)后，可以滿足在體移植的要求。
　　第三部分：殼聚

6、糖支架修復(fù)坐骨神經(jīng)缺損的有效性評(píng)價(jià)
　　目的：評(píng)價(jià)高仿真殼聚糖支架在體橋接大鼠15mm坐骨神經(jīng)缺損的修復(fù)效果。
　　方法：以前期制備的高仿真神經(jīng)支架修復(fù)大鼠15mm坐骨神經(jīng)缺損，應(yīng)用形態(tài)計(jì)量學(xué)、逆行示蹤、神經(jīng)電生理以及行為學(xué)檢測(cè)評(píng)價(jià)該高仿真支架的修復(fù)效果。
　　結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的殼聚糖支架具有軸向平行排列的微管樣超微結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)高度仿真于正常神經(jīng)基底膜結(jié)構(gòu)。在橋接大鼠15mm坐骨神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)中，該仿真支架可取得與自體