環(huán)境因子對三萜含量影響的正交分析及羥甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的克隆、分析.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文環(huán)境因子對三萜含量影響的正交分析及羥甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的克隆、分析姓名：李娜申請學位級別：碩士專業(yè)：微生物學指導教師：趙明文20060601南京農(nóng)業(yè)大學碩士論文；環(huán)境因子對三萜含量影響的正交分析及羥甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的克隆、分析將靈芝聊GcoA還原酶基因全長cDNA序列和基因組DNA序列進行比對分析，發(fā)現(xiàn)靈芝HMGCoA還原酶基因全長中，含有7個外顯子和6個內(nèi)舍子將靈芝HMGCoA還原酶基因全長c

2、DNA序列進行Blast分析，發(fā)現(xiàn)與基因具有較高同源性的物種是新型隱球菌(￡aPof02“mans)，兩者N一端同源性達到46％，C端保守催化域同源性達到83％對靈芝HMGcoA還原酶基因進行一系列生物信息學分析，發(fā)現(xiàn)HMG—CoA還原酶基因內(nèi)存在2個保守的HMGCoA結(jié)合位點E(838)和T(867)和2個NAD(H)結(jié)合住點D(963)和G(1112)；含兩段PEST序列K(653)扣R(725)；對跨膜結(jié)構(gòu)域進行預測，發(fā)現(xiàn)蛋白內(nèi)舍

3、3個跨膜結(jié)構(gòu)，分別位于氨基酸：V(13)一L(35)，L(222)一A(244)N(251)一L(270)：在N一端存在1個信號肽序列，最可能的切割位點在笫30和第31個氨基酸之間：TLAYF；對HMGCoA還原酶二級結(jié)構(gòu)進行預測，發(fā)現(xiàn)了1個依賴于cAMP的蛋白激酶的磷酸化結(jié)合位點以及12個蛋白激酶c磷酸化位點。其二級結(jié)構(gòu)內(nèi)，有415％螺旋結(jié)構(gòu)，113％的折疊結(jié)構(gòu)和471％的無規(guī)則卷曲利用Clustx和MEGA3O建了靈芝HMGR基因的

4、系統(tǒng)進化樹，發(fā)現(xiàn)其與真菌界中擔子茵親緣關(guān)系最為密切，進化關(guān)系符合經(jīng)典的物種分類的結(jié)果通過競爭性RTPCR的方法，研究了不同碳源培養(yǎng)條件下，靈芝HMGCoA還原酶基因的表達情況，表明不同碳源培養(yǎng)條件HMGCoA還原酶基因表達量有所差異，這種差異與三萜含量的變化呈正相關(guān)。根據(jù)靈芝HMGCoA還原酶基因組DNA序列，設(shè)計引物，以總基因組DNA為模板，擴增了其上游啟動子序列，該序列長約2Kb，用Soflberry軟件對啟動子序列進行分析，發(fā)現(xiàn)靈