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1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文脫水蛋白和CBF1轉(zhuǎn)錄因子對(duì)植物抗旱性和抗凍性作用的研究姓名:邊紅武申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):遺傳學(xué)指導(dǎo)教師:朱睦元20030801浙江大學(xué)博士學(xué)位逾丈以煙草為材料進(jìn)行了轉(zhuǎn)CBFl基因研究,并對(duì)轉(zhuǎn)基因后代開展了形態(tài)變異觀察、抗凍性和抗旱性測(cè)定以及遺傳穩(wěn)定性分析。主要結(jié)果如下:1,將CBFl基因與CaMV35S啟動(dòng)子融合構(gòu)建植物表達(dá)載體pBll21CBFl,以農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化煙草,獲得轉(zhuǎn)化植株。經(jīng)C日F,基因的PC
2、R鑒定和轉(zhuǎn)基因后代(包括Tl、T2和T3代)的卡那霉素抗性分析,獲得2個(gè)單一位點(diǎn)插入的轉(zhuǎn)基因純系,證明了外源基因在轉(zhuǎn)基因煙草中的表達(dá)及遺傳。2采用電解質(zhì)滲漏檢測(cè)和小苗凍害觀察進(jìn)行轉(zhuǎn)基因后代的抗凍性檢測(cè),結(jié)果顯示CBFl基因的表達(dá)有利于冰凍條件下細(xì)胞膜和葉綠體膜的穩(wěn)定性,從而使轉(zhuǎn)基因煙草的抗凍性增強(qiáng)。3,采用不同PEG處理濃度和處理對(duì)間對(duì)轉(zhuǎn)基因后代進(jìn)行了抗旱性測(cè)定,發(fā)現(xiàn)可選用15%的PEG濃度處理48小時(shí)來測(cè)定小苗抗旱性。結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因煙
3、草的抗旱性比野生型煙草增強(qiáng)。4轉(zhuǎn)CBFl基因煙草出現(xiàn)明顯的表型變化,主要有植株矮化、花器官變異、葉片卷曲或細(xì)長(zhǎng)和果實(shí)數(shù)減少等。分析原因可囂是與C/3F!轉(zhuǎn)錄因子所具有的AP2/EREBP結(jié)構(gòu)域的功能有關(guān)。AP2基因是擬南芥花器官特征特異性基因,能在各輪花器宮及莖葉中表達(dá),無組織特異性。推測(cè)CBFl基因的組成性表達(dá),干擾了煙草原有的花器官和莖葉生長(zhǎng)發(fā)育,導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因植株的表型改變。關(guān)鍵詞:煙草鐵皮石斛類原球莖熱穩(wěn)定蛋白脫水蛋白CBFl轉(zhuǎn)錄因
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