小膠質(zhì)細(xì)胞在糖及胰島素聯(lián)合作用模型下的功能變化.pdf

1、目的：
　　我們前期研究發(fā)現(xiàn)胰島素可對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的功能及其分泌的神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）產(chǎn)生影響，本實(shí)驗(yàn)基于前期研究，探討在糖和胰島素聯(lián)合作用模型下小膠質(zhì)細(xì)胞的功能變化及NGF的高親和性受體TrkA表達(dá)量變化。
　　方法：
　　用BV2細(xì)胞株代表小膠質(zhì)細(xì)胞，PC12細(xì)胞株代表神經(jīng)元。將BV2細(xì)胞作為研究對(duì)象，以PC12細(xì)胞存活率反映其功能。實(shí)驗(yàn)分為低糖組（葡萄糖5mmol/L）、對(duì)照組（葡萄糖10mmol/L）、高糖組(

2、葡萄糖23mmol/L)以及波動(dòng)組（起始葡萄糖濃度為5mmol/L，2小時(shí)后增至23mmol/L，3小時(shí)后再降至5mmol/L，以此再做兩個(gè)循環(huán)，然后以23mmol/L過(guò)夜），將各組的BV2細(xì)胞分別用0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、150ng/ml的胰島素處理，培養(yǎng)24h后收集上清液，用以培養(yǎng)PC12細(xì)胞。將收集好的BV2細(xì)胞上清液分別加入PC12細(xì)胞中。繼續(xù)培養(yǎng)PC12細(xì)胞1h，采用MTT法檢測(cè)各組PC12細(xì)胞存活率，

3、應(yīng)用Western-blot法檢測(cè)各組BV2細(xì)胞TrkA的表達(dá)情況，明確不同糖濃度與胰島素聯(lián)合作用對(duì)BV2細(xì)胞功能以及TrkA表達(dá)量的影響。應(yīng)用雙色紅外激光成像系統(tǒng)，對(duì)條帶進(jìn)行檢測(cè)，獲取條帶的圖像，利用灰度值分析軟件對(duì)條帶灰度值進(jìn)行定量，最后以目的蛋白的灰度值比內(nèi)參的灰度值表示蛋白表達(dá)量。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)值均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示。組內(nèi)比較采用單因素方差分析，若差異具有顯著性，則進(jìn)一步行LSD-t檢

4、驗(yàn)；組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，假設(shè)檢驗(yàn)顯著性水平均設(shè)定為0.05。
　　結(jié)果：
　　1.低糖組、對(duì)照組、高糖組以及波動(dòng)組在胰島素濃度為0ng/ml時(shí)，PC12細(xì)胞存活率依次為56.75±0.84%、64.06±1.8%、72.05±0.75%、53.91±1.23%；對(duì)應(yīng)各組在胰島素濃度為50ng/ml、100ng/ml和150ng/ml時(shí)PC12細(xì)胞存活率依次為58.58±1.80%、68.37±1.25%、74.47±0

5、.21%、56.05±0.34%；1.64±0.61%、71.49±1.59%、77.16±2.37%、58.01±0.82%；50.66±0.82%、59.72±1.46%、63.15±0.21%、47.69±0.66%。同一胰島素濃度下，與對(duì)照組相比，高糖組PC12細(xì)胞存活率均顯著增高（P＜0.05）；低糖組及波動(dòng)組的PC12細(xì)胞存活率降低（P＜0.01），且波動(dòng)組其存活率更低（P＜0.05）；并且在糖濃度穩(wěn)定和適宜濃度胰島素（10

6、0ng/ml）聯(lián)合時(shí)PC12細(xì)胞存活率較高，葡萄糖濃度波動(dòng)和高濃度胰島素(＞100ng/ml)聯(lián)合時(shí)PC12細(xì)胞存活率較低。
　　2.低糖組、對(duì)照組、高糖組以及波動(dòng)組在胰島素濃度為0ng/ml時(shí)，BV2細(xì)胞 TrkA蛋白表達(dá)量依次為7.12±0.89、8.81±0.29、10.01±0.30、7.17±2.64；對(duì)應(yīng)各組在胰島素濃度為50ng/ml、100ng/ml和150ng/ml時(shí)BV2細(xì)胞 TrkA蛋白表達(dá)量依次為22.53

7、±0.40、24.34±0.67、26.34±0.67、21.41±7.24；55.42±1.01、76.27±0.89、83.10±3.85、35.66±0.69；50.71±1.59、51.7±0.55、54.51±1.09、24.96±0.92。同一胰島素濃度下，與對(duì)照組相比，高糖組的BV2細(xì)胞TrkA蛋白表達(dá)量顯著增高（P＜0.05）；而低糖組及波動(dòng)組的BV2細(xì)胞TrkA蛋白表達(dá)量降低（P＜0.05），且波動(dòng)組其表達(dá)量更低（P＜

8、0.05）。隨著胰島素濃度的升高（胰島素濃度≤100 ng/ml），BV2細(xì)胞TrkA蛋白表達(dá)量逐漸增多（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.小膠質(zhì)細(xì)胞在一定濃度的糖和胰島素作用下發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)性作用，而在低糖(5mmol/L)、糖波動(dòng)或者高濃度胰島素(＞100ng/ml)時(shí)表現(xiàn)為損傷性作用，且在糖波動(dòng)聯(lián)合高濃度胰島素(＞100ng/ml)時(shí)損傷性作用最強(qiáng)；
　　2.小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)性作用時(shí)TrkA的表達(dá)量增多，而其