新月細(xì)柱藻種復(fù)合體及海鏈藻多樣性研究.pdf

1、細(xì)柱藻屬(Cylindrotheca)是海洋硅藻中一個(gè)較小的類群，目前僅有少數(shù)幾個(gè)種被描述。新月細(xì)柱藻(Cylindrotheca closterium(Ehrenberg)LewinetReimann)是膠州灣常見的底棲硅藻種類，也是雙殼類養(yǎng)殖的重要餌料生物。C.closterium與其它海洋硅藻相比，其鑒定工作存在諸多問題，也極易和長菱形藻(Nitzschia longissima、)混淆。 本研究建立了采自膠州灣的12株

2、大小存在差異的底棲硅藻單克隆培養(yǎng)體系，其中11株經(jīng)鑒定確認(rèn)為C.closterium,1株確定為彎端長菱形藻(N.longissimavar．rversa Grunoow)。我們對其核編碼的SSU rDNA基因和葉綠體編碼的 rbcl基因進(jìn)行了克隆和測序。序列分析表明，11株C.closterium的SSU rDNA基因和rbL基因存在很大的序列變異：1775bp的SSU rDNA基因擴(kuò)增片斷中有31個(gè)變異位點(diǎn)；1190bp的rbcL基

3、因擴(kuò)增片斷中存在118個(gè)變異位點(diǎn)，其中108個(gè)變異位點(diǎn)為密碼子的第三位堿基。依據(jù)rbcL基因核苷酸序列推導(dǎo)的氨基酸殘基變異明顯小于核苷酸變異。彎端長菱形藻SSU rDNA和rbcL基因擴(kuò)增片斷分別長l777bp和1190bp，與新月細(xì)柱藻序列差異很大。 分別通過兩基因核苷酸序列構(gòu)建的鄰接(Neighbor joining，NJ)系統(tǒng)發(fā)育樹將11株C.losterium分成相同的六個(gè)分支(clade)。通過SSU rDNA基因構(gòu)

4、建的NJ樹將所有的細(xì)柱藻聚為一支，將彎端長菱形藻與其它菱形藻種類聚為另一支。SSU rDNA基因NJ樹將細(xì)柱藻分為兩個(gè)明顯的支系(lineage)：支系I由12株C.closterium組成，包括本實(shí)驗(yàn)分離到的全部11株C.closterium，該支系中部分節(jié)點(diǎn)沒有得到較高的支持率(<50％)；支系Ⅱ包括兩株C.closterium和一株Cylindrotheca fusiformis。在rbcL基因NJ樹中細(xì)柱藻也形成兩個(gè)支系，11株

5、C.closterium組成一個(gè)支系，系統(tǒng)樹中每個(gè)節(jié)點(diǎn)均得到很高的支持率(>70[％])。統(tǒng)計(jì)分析表明，支系I中株系間的平均遺傳距離高于其它微藻種的種內(nèi)變異程度，差異極顯著(P<0.01)。上述分析結(jié)果證實(shí)C.closterium實(shí)際上是一個(gè)種復(fù)合體(species complex)，可以被細(xì)分為若干個(gè)種。 此外，我們?yōu)槔梅肿由飳W(xué)方法分析表層海水主要赤潮形成藻的動(dòng)態(tài)變化、快速鑒定赤潮形成藻種，設(shè)計(jì)了海鏈藻目特異引物，擴(kuò)增了