采用mRNA差異顯示技術(shù)分離鹽生植物狐米草(Spartina patens)耐鹽相關(guān)基因的研究.pdf

1、南開大學(xué)碩士學(xué)位論文采用mRNA差異顯示技術(shù)分離鹽生植物狐米草(Spartinapatens)耐鹽相關(guān)基因的研究姓名：吳學(xué)鋒申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：杜榮騫2002.5.1采穰nlRN^差異顯示技術(shù)分離鹽生植物舔采草(Spartinapatens)耐掛相關(guān)基因的研究摘要摘要植物耐鹽性研究對消除鹽堿地對人類的威脅有著重要的理論和實踐意義。耐鹽基因的分離已成為這一研究領(lǐng)域最為艱難、最具創(chuàng)新性的課題之一，而mRNA差異顯示技術(shù)在

2、分離未知基因方面有其獨到的優(yōu)勢。本研究以鹽生植物狐米草(Spartinapatens)為材料，采用mRNA差異顯示技術(shù)(DDRTPCR)進(jìn)行了分離耐鹽相關(guān)基因的有益嘗試。一—、、一首先探討了狐米草在鹽脅迫條件下與對照材料全蛋白電泳帶譜的差異，SDSPAGE表明：27KDa、75KDa的兩種蛋白被明顯誘導(dǎo)，同時許多小分子量蛋白亦被鹽脅迫所誘導(dǎo)。這一結(jié)果驗證了植物適應(yīng)鹽脅迫在蛋白表達(dá)上的差異，同時為進(jìn)一步的mRNA差異顯示分離基因提供了依據(jù)

3、。分別以鹽脅迫和對照材料的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成的eDNA為模板，進(jìn)行了不同的錨定引物與任意引物組合的差異顯示，發(fā)現(xiàn)鹽脅迫條件下mRNA差異表達(dá)的不同情形。經(jīng)Northern點雜交檢測后，最終確定5個差異片段：SRGl(APlRP4組合)，SRG2、SIGl、SIG2、SIG3(AP2RP2組合)。其中SRGl、SRG2為鹽脅迫抑制表達(dá)的片段，SIGl、SIG2、SIG3為鹽脅迫誘導(dǎo)表達(dá)的片段。對5個差異片段進(jìn)行克隆、測序，并在NCBI數(shù)據(jù)

4、庫系統(tǒng)分別進(jìn)行核苷酸和氨基酸序列同源性信息查詢。結(jié)果發(fā)現(xiàn)5個片段的序列與已知基因沒有明顯同源性，認(rèn)為它們是未知序列；選取GenBank中est子數(shù)據(jù)庫查詢差異片段的翻譯氨基酸順序與GenBank中EST部分的同源性，采用blastx程序分析差異片段的序列及ESTs，分析結(jié)果表明：SRGl翻譯氨基酸順序與ATPaseIllsubunit、H一transportingATPsynthaselike有很高的同源性(達(dá)88％)，SRG2、SIG