渤海海域抗菌活性微生物的篩選和鑒定.pdf

1、在不同溫度和pH條件下，利用不同營(yíng)養(yǎng)物濃度的海洋細(xì)菌、真菌、放線(xiàn)菌分離培養(yǎng)基，從渤海海水樣品中篩選到87株海洋細(xì)菌、127株海洋真菌(均為霉菌)和14株海洋放線(xiàn)菌。 28℃、160r/min條件下對(duì)所篩的87株海洋細(xì)菌進(jìn)行液體發(fā)酵，利用牛津杯法對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行抗細(xì)菌活性檢測(cè)，研究結(jié)果表明：28株細(xì)菌對(duì)大腸桿菌(Escherichiacoli)或金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)有不同程度的抑制作用，陽(yáng)性篩選率

2、為32.2％；8株細(xì)菌可抑制上述2種指示菌，陽(yáng)性篩選率為9.2％，A49菌株的活性最強(qiáng)。以玉蜀黍平臍蠕孢菌(Bipolarismaydis)、大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)、麥根腐平臍蠕孢菌(Bipolarissorokiniana)、大豆尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)、蘋(píng)果黑腐皮殼菌(Valsamali)、茄鏈格孢菌(Alternariasolani)、煙草疫霉菌(Phytophthorapar

3、asiticavarnicotianae)和立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)等8種植物病原真菌為指示菌，采用濾紙片擴(kuò)散法對(duì)28株抗性細(xì)菌進(jìn)行活性檢測(cè)，結(jié)果均呈陰性。通過(guò)對(duì)菌株A49進(jìn)行菌落形態(tài)、個(gè)體形態(tài)觀察以及生理生化試驗(yàn)，依據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》可知菌株A49屬于芽孢桿菌科(Bacillaceae)，芽孢桿菌屬(Bacillussp.)。對(duì)其16SrDNA進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，確定其為芽孢桿菌屬，暫命名為Bacilliu

4、ssp.A49。 以8種植物病原真菌為指示菌，采用雙向培養(yǎng)法對(duì)116株常溫海洋霉菌進(jìn)行抗菌活性初篩，結(jié)果得到41株霉菌對(duì)植物病原真菌有不同程度的抑制作用。根據(jù)《真菌鑒定手冊(cè)》，對(duì)其中抗菌譜較廣的4株霉菌進(jìn)行了地位分類(lèi)，確認(rèn)32＃霉菌為曲霉屬，40＃霉菌為耳霉屬，67＃和18＃霉菌為青霉屬。利用濾紙片擴(kuò)散法對(duì)41株活性霉菌進(jìn)行復(fù)篩，得到l株抗菌譜廣、活性強(qiáng)的67＃菌株，其他菌株沒(méi)有檢測(cè)到活性。利用生長(zhǎng)速率法檢測(cè)67＃菌株發(fā)酵液對(duì)B

5、.maydis、V.dahliae、F.oxysporum、V.mali、P.nicotianae和A.solani等6種指示菌的抑制率和EC50，抑制率分別為40.0％、30.6％、36.7％、23.5％、30.0％和26.3％，EC50分別為3.1615、3.575l、3.1623、4.8686、4.3914和4.7676。以大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為指示菌，利用牛津杯法對(duì)41株活性霉菌進(jìn)行抗細(xì)菌活性檢測(cè)，沒(méi)有篩選到既抑制真菌又抑制