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文檔簡介
1、嗜酸氧化亞鐵氧化硫桿菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)中的HiPIP是高氧化還原電位鐵硫蛋白組的成員之一,具有電子傳遞功能,它是嗜酸氧化亞鐵硫桿菌鐵氧化電子傳遞鏈的組分之一。但是至今HiPIP的電子轉導機理尚未明確。本論文從A.ferrooxidans中克隆出HiPIP的基因后表達,并用一步親和層析法純化出蛋白。我們通過定點突變構建了HiPIP的突變質粒C25A,C28A,C37A,C50A。通過紫外-可
2、見掃描及電子順磁共振結果證實了C25A,C28A,C37A,C50A對于HiPIP結合[Fe4S4]的重要性。 由iscSUA操縱子編碼的三個蛋白IscS(半胱氨酸脫硫酶),IscU(支架蛋白)和IscA(鐵離子伴侶)參與了A.ferrooxidans鐵硫簇結構的組裝,但是機理至今仍不清楚。從A.ferrooxidansqp克隆IscA的基因,表達,并通過一步親和層析法純化出蛋白。通過定點突變構建了蛋白的突變體D97A,E103
3、A。分子模擬及紫外、電子順磁共振結果證明了D97位點參與了鐵硫簇的結合,而E103對IscA與鐵硫簇的結合卻無明顯的影響。A.ferrooxidans中的IscA可能作為一個平臺完善鐵硫簇結構得前組裝并把它傳遞給目標蛋白,這對于A.ferrooxidans中其他鐵硫蛋白如HiPIP的成熟是必需的。 嗜酸氧化亞鐵氧化硫桿菌中HiPIP有參與鐵和硫呼吸電子傳遞鏈,它具有[4Fe-4S]簇。我們在本論文中證實了HiPIP能夠在體外利用
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