基于細(xì)胞凋亡探討烏梅丸治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制.pdf

1、目的:通過(guò)觀察烏梅丸對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞凋亡的影響，并檢測(cè)與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切的Caspase-3、Fas、FasL、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)，以探討烏梅丸治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制，以期明確烏梅丸的作用靶點(diǎn)，為烏梅丸的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:將50只SD大鼠，隨機(jī)分成5組:空白對(duì)照組、UC模型組、UC+烏梅丸大劑量組、UC+烏梅丸中劑量組、UC+烏梅丸小劑量組，每組10只。除空白組外，余行潰瘍性結(jié)腸炎造模。

2、以50％的TNBS/乙醇溶液按100mg/kg劑量用注射器緩慢推入結(jié)腸，誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎形成。從造模第4天起，空白對(duì)照組和UC模型組以10ml/kg劑量生理鹽水灌胃，烏梅丸大、中、小劑量組分別以53.2g/kg、26.6g/kg、13.3g/kg劑量烏梅丸灌胃處理，各組大鼠連續(xù)灌胃10天后處死。ELISA法檢測(cè)Caspase-3的表達(dá)，TUNEL法檢測(cè)結(jié)腸上皮細(xì)胞凋亡，Q-PCR法檢測(cè)結(jié)腸上皮細(xì)胞Fas、FasL的表達(dá)，免疫組織化學(xué)法檢

3、測(cè)結(jié)腸上皮細(xì)胞Bcl-2、Bax的表達(dá)。通過(guò)分析烏梅丸對(duì)上述各項(xiàng)指標(biāo)的影響，探討其對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:(1)大鼠一般狀態(tài):空白組大鼠狀態(tài)顯著優(yōu)于模型組大鼠，烏梅丸大、中、小劑量組用藥10天后均能明顯改善大鼠的各項(xiàng)體征，其中以烏梅丸大、中劑量組大鼠扎堆、發(fā)抖、喜靜懶動(dòng)等情況明顯改善，烏梅丸小劑量組仍有上述現(xiàn)象。
　　(2)病理組織學(xué)觀察:模型組大鼠結(jié)腸黏膜表面起伏不平，可見(jiàn)潰瘍面形成或黏膜大面積缺損，結(jié)腸充血

4、、水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體萎縮或消失，杯狀細(xì)胞排列紊亂。給藥治療后，烏梅丸大、中劑量組病理改變明顯減輕，烏梅丸小劑量組仍可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　(3)Caspase-3蛋白的含量:與空白組比較，模型組大鼠結(jié)腸上皮caspase-3含量顯著增強(qiáng)(P＜0.01);與模型組比較，烏梅丸大劑量組、烏梅丸中劑量組有顯著性差異(P＜0.01)，烏梅丸小劑量組有差異(P＜0.05);與烏梅丸大劑量組比較，烏梅丸中劑量組有差異(P＜0.0

5、5)，烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(4)Fas、FasL蛋白表達(dá)水平:與空白組比較，模型組大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞Fas和FasL表達(dá)顯著增強(qiáng)(P＜0.01);與模型組比較，烏梅丸大劑量組、烏梅丸中劑量組、烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01);與烏梅丸大劑量組比較，烏梅丸中劑量組有差異(P＜0.05)，烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(5)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平:與空白組比較，模

6、型組大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)明顯減弱，Bax蛋白的表達(dá)顯著增強(qiáng)(P＜0.01);與模型組比較，烏梅丸大劑量組、烏梅丸中劑量組，烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01);與烏梅丸大劑量組比較，烏梅丸中劑量組有差異(P＜0.05)，烏梅丸小劑量組有顯著性差異(P＜0.01)。
　　(6)結(jié)腸上皮細(xì)胞凋亡情況:與空白組比較，模型組大鼠結(jié)腸上皮凋亡細(xì)胞顯著增多(P＜0.01);與模型組比較，烏梅丸大劑量組、烏梅丸中劑量組、烏梅