擬南芥脅迫誘導(dǎo)microRNA的分離和功能研究及microRNA啟動(dòng)子分析.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文擬南芥脅迫誘導(dǎo)microRNA的分離和功能研究及microRNA啟動(dòng)子分析姓名：田鑫申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：鄭成超20090606擬南芥脅迫誘導(dǎo)m i c r o R N A 的分離和功能研究及m i c r o R N A 啟動(dòng)子分析1 ．通過(guò)m i R N A 芯片實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了1 4 個(gè)m i R N A 在受到三種脅迫處理時(shí)表達(dá)量發(fā)生變化，其中有1 0 個(gè)m i R N A 響

2、應(yīng)高鹽信號(hào)、4 個(gè)響應(yīng)干旱信號(hào)，還有1 0 個(gè)響應(yīng)冷信號(hào)。m i R l 6 5 ，m i R 3 1 9 和m i R 3 9 3 在受到高鹽和冷處理時(shí)表達(dá)量上調(diào)，m i R l 6 7 受高鹽和干旱處理誘導(dǎo)，而m i R l 6 8 ，m i R l 7 1和m i R 3 9 6 在三種脅迫條件下均誘導(dǎo)表達(dá)。2 ．R T - P C R 實(shí)驗(yàn)證明m i R N A 芯片結(jié)果可信，同時(shí)對(duì)脅迫誘導(dǎo)m i R N A在不同處理下不同時(shí)間

3、點(diǎn)的表達(dá)模式進(jìn)行了檢測(cè)，證明這些m i R N A 的表達(dá)可以受到脅迫環(huán)境調(diào)節(jié)，而且部分m i R N A 可以同時(shí)響應(yīng)多種脅迫處理。3 ．通過(guò)分析m i R N A 基因上游1 0 0 0 b p 序列，發(fā)現(xiàn)在這些區(qū)域存在脅迫響應(yīng)順式作用元件，如A B R E s ( A B A 。r e s p o n s e e l e m e n t s ) ，A R E s( a n a e r o b i c i n d u c t i o

4、 n e l e m e n t s ) ，M B S ( M Y B b i n d i n g s i t e i n v o l v e d i nd r o u g h t —i n d u c i b i l i t y ) ，H S E s ( h e a t s t r e s s r e s p o n s i v e e l e m e n t s ) ，L T R s( 1 0 w ．t e m p e r a t

5、u r er e s p o n s i v e e l e m e n t s ) ，T C - r i c hr e p e a t ( d e f e n s e a n d s t r e s sr e s p o n s i v e e l e m e n t s ) ，進(jìn)一步證明這些m i R N A 可以參與植物脅迫響應(yīng)過(guò)程。4 ．通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)有O s m i R l 5 9 a ，O s m i R 3 9 8 a ，O s

6、 m i R 4 4 3 和A t m i R 3 9 3 a ，A t m i R 3 9 6 b ，A t m i R 3 9 T o ，A t m i R 4 0 0 前體上游序列驅(qū)動(dòng)的g u s 報(bào)告基因的轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行G U S 染色，發(fā)現(xiàn)所分離7 段m i R N A 的前體上游序列均具有啟動(dòng)子活性。5 ．不同m i R N A 啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)基因擬南芥在各發(fā)育時(shí)期的G U S 組織染色結(jié)果顯示，O s m i R l 5 9

7、 a ，O s m i R 3 9 8 a ，A t m i R 3 9 6 b ，A n I l i R 3 9 7 b ，A t m i R 4 0 0啟動(dòng)子為組成型啟動(dòng)子；A t m i R 3 9 3 a 和O s m i R 4 4 3 啟動(dòng)子為組織特異型啟動(dòng)子，其中A t m i R 3 9 3 a 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的g u s 主要在擬南芥的葉脈和主根中表達(dá)，而O s m i R 4 4 3 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的g u s 基因僅在擬南