高效苜蓿根瘤菌株的篩選.pdf

1、該實驗旨在利用celB基因標(biāo)記技術(shù)從土著根瘤菌中篩選出與苜蓿品種相匹配的有效性高、競爭性強的高效苜蓿根瘤菌株.盛世是四川省正在推廣種植的苜蓿品種,但目前還沒有相匹配的優(yōu)質(zhì)根瘤菌劑,篩選與之匹配的高效根瘤菌株用于人工接種,對于苜蓿的高產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)栽培具有重要意義.從四川雅安、重慶北碚、萬州采集野生苜蓿根瘤,利用平板劃線法分離純化,經(jīng)菌落形態(tài)特征鑒定、革蘭氏染色鏡檢和回接試驗獲得了93株純菌株,通過與苜蓿品種-盛世(S)在無氮水培液中進行結(jié)瘤試

2、驗和有效性分析,并結(jié)合菌株的地理來源,初篩出了與對照相比有效性較高的4株苜蓿根瘤菌,分別為Y6-1-1、BB<,1>-8-1-1、BB<,2>-2-1-1、WZ-6-2-2.然后利用celB基因標(biāo)記技術(shù)對篩選出的菌株進行競爭性研究.在基因標(biāo)記的方法中,抗鏈霉素是重要的突變篩選標(biāo)記,供試出發(fā)菌株抗鏈霉素濃度不得高于250μg/ml,因此需要對所選出的菌株進行鏈霉素抗性測定,選出敏感型菌株進行基因標(biāo)記.通過鏈霉素抗性測定,發(fā)現(xiàn)篩選出的4株苜

3、蓿根瘤菌Y6-1-1、BB<,1>-8-1-1、BB<,2>-2-1-1、WZ-6-2-2對鏈霉素的耐受濃度都低于100μg/ml.通過供體大腸桿菌HAMBI2356與根瘤菌接合的方法對以上四個菌株進行基因標(biāo)記,成功地將celB基因?qū)肓诉@四個菌株中;然后對標(biāo)記基因可能會對標(biāo)記菌株產(chǎn)生的影響進行了一系列試驗和檢測,包括通過測定代時和傳代次數(shù)來檢測標(biāo)記基因在標(biāo)記菌株內(nèi)的穩(wěn)定性以及標(biāo)記基因?qū)?biāo)記菌株生長的影響;通過水培試驗來檢測標(biāo)記基因?qū)?biāo)

4、記菌株競爭結(jié)瘤能力和共生固氮有效性的影響.該試驗證明了標(biāo)記基因在標(biāo)記菌株內(nèi)能穩(wěn)定傳代,而且對標(biāo)記菌株的生長、競爭結(jié)瘤能力以及固氮有效性都沒有產(chǎn)生顯著影響,因此celB基因標(biāo)記技術(shù)可以作為一種簡便、直觀而又有效的檢測手段用于追蹤根瘤菌株在土壤中的競爭性.進一步通過土壤盆栽試驗和田間試驗,比較了標(biāo)記菌株與土著菌的競爭結(jié)瘤能力和固氮有效性,結(jié)果表明有三個菌株與對照相比在占瘤率、瘤重、總瘤數(shù)上差異顯著,占瘤率都在72﹪以上,顯著提高了植株的干重