桑葉多酚的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其抗氧化和脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、1.研究的目的與意義
　　桑樹(Morus albaL.)在中國的栽培歷史已有近5000年，桑葉是其地上生物量最大的部分，為中國傳統(tǒng)中藥。桑葉自古就作為藥茶和膳食補(bǔ)充劑被人們食用，其提取物在細(xì)胞和動(dòng)物模型中被證明具有抗氧化和抗糖尿病活性，而這些作用與桑葉中的酚類化合物有密切關(guān)系。目前國家藥典中關(guān)于桑葉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅考察蘆丁一個(gè)單體，這還不足以全面反映桑葉的特征化學(xué)成分組成，有必要進(jìn)一步補(bǔ)充和完善考察的酚類單體種類，而且關(guān)于桑葉的脂質(zhì)

2、代謝調(diào)節(jié)作用大部分是基于動(dòng)物水平的研究結(jié)果，其深入的分子機(jī)制研究還鮮有報(bào)道。本論文針對(duì)上述問題，開展桑葉酚類物質(zhì)譜的研究，建立桑葉多酚質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以研究脂代謝的主要細(xì)胞系3T3-L1為對(duì)象，研究桑葉多酚對(duì)脂質(zhì)代謝紊亂的改善作用，以探討桑葉多酚在脂質(zhì)代謝紊亂方面的調(diào)控機(jī)制。
　　由于桑樹品種、成熟度和采收時(shí)間等會(huì)對(duì)桑葉多酚的含量造成較大影響，同時(shí)提取溶劑、料液比、提取溫度等因素在桑葉多酚的提取得率方面也存在重要影響，因此本課題是在桑葉

3、多酚提取工藝優(yōu)化的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究不同成熟度、品種、采收時(shí)間對(duì)桑葉抗氧化活性及酚類單體成分含量的影響，確定桑葉多酚的最佳成熟度、品種與采收時(shí)間，建立以桑葉多酚及其單體組成為核心的桑葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，篩選獲得酚類物質(zhì)組成最佳的桑樹品種。以桑葉多酚提取物為研究對(duì)象，考察其對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響，跟蹤細(xì)胞的脂質(zhì)堆積的變化，探明桑葉多酚對(duì)相關(guān)脂質(zhì)表型和基因表達(dá)的影響。研究結(jié)果可為開發(fā)桑葉輔助降血脂的功能性食品及藥品提供理論依據(jù)。<

4、br>　　2.研究方法
　　本研究首先選用“粵椹大10”品種的桑葉為原料，采用響應(yīng)面法在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上優(yōu)化超聲波輔助提取桑葉多酚得到最佳工藝；以“農(nóng)桑12號(hào)”品種桑葉為對(duì)象在同一時(shí)間采摘其不同成熟度的桑葉樣品，選擇8個(gè)代表性品種，在不同生長時(shí)間采摘桑葉樣品，對(duì)上述原料采用優(yōu)化的最佳工藝提取桑葉多酚，高效液相色譜外標(biāo)法檢測(cè)各樣品的酚類單體組成和含量，得到不同品種桑葉多酚物質(zhì)譜及其動(dòng)態(tài)變化規(guī)律；采用總酚含量、氧自由基吸收能力（ORA

5、C）、DPPH清除能力來評(píng)定抗氧化能力指標(biāo)；用 CCK-8法檢測(cè)桑葉多酚提取物對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖的影響，油紅染色法檢測(cè)脂質(zhì)堆積，酶法檢測(cè)細(xì)胞上清液游離脂肪酸以及細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯和總膽固醇濃度，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR法檢測(cè)前脂肪細(xì)胞分化過程中和脂代謝相關(guān)的過氧化物酶體增殖物激活受體-γ（PPAR-γ）、CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白-α（C/EBPα）、脂肪酸合成酶（FAS）、脂聯(lián)素（adiponectin）基因表達(dá)情況。
　　3.結(jié)果

6、>　　桑葉多酚最佳的提取工藝：乙醇濃度為70％、料液質(zhì)量濃度為0.03 g/mL、超聲時(shí)間為60 min。成熟度與桑葉抗氧化活性、酚類單體（綠原酸、安息香酸、蘆丁和金絲桃苷）的含量呈負(fù)相關(guān)性；桑葉中主要多酚單體綠原酸、安息香酸、蘆丁和金絲桃苷的含量和成熟度也呈負(fù)相關(guān)性；8個(gè)品種中“阿2”、“紫白4”和“抗青10號(hào)”的酚類單體含量總和較高，抗氧化活性也較高；不同采收時(shí)間對(duì)桑葉酚類物質(zhì)組成與含量影響顯著，10月份采收的桑葉酚類單體含量總和最

7、高、抗氧化活性最強(qiáng)，其次是3月份，綜合栽培與應(yīng)用因素，10月份的“抗青10號(hào)”的桑葉是最佳原料；桑葉多酚提取物表現(xiàn)出良好的降脂作用，在60~70μg/mL的濃度時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，在40~50μg/mL時(shí)可以極顯著減少3T3-L1前脂肪細(xì)胞脂質(zhì)堆積，抑制表觀指標(biāo)游離脂肪酸溢出、降低細(xì)胞中甘油三酯和膽固醇的濃度，下調(diào)影響細(xì)胞分化相關(guān)的基因PPARγ、C/EBPα、FAS、Adiponectin的表達(dá)。
　　4.結(jié)論