芍藥苷通過A1腺苷受體調(diào)節(jié)MAPKs通路及Bcl-2表達(dá)抑制膿毒癥小鼠心功能障礙的作用研究.pdf

1、目的：研究A1腺苷受體在芍藥苷抑制膿毒癥小鼠心功能障礙中的作用機(jī)制
　　方法：
　　1.采用SPF級(jí)體重在30-35g之間的雄性昆明小鼠，使用經(jīng)典的盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）復(fù)制小鼠膿毒癥模型并延用前期實(shí)驗(yàn)探索的合適的Pae（20 mg/k g，0.1 ml/10 g）和DPCPX（特異性A1腺苷受體阻斷劑，1 mg/kg）劑量。小鼠隨機(jī)分為8組，分別為：A:CLP+DMSO（以50％的二甲基亞砜作為DPCPX的藥物溶劑）+H

2、2O；B:CLP+DMSO+Pae；C:CLP+DPCPX+H2O；D:CLP+DPCPX+Pae；E:Sham+DMSO+H2O；F:Sham+DMSO+Pae；G:Sham+DPCPX+H2O；H:Sham+DPCPX+Pae。
　　2.造模術(shù)后12 h切取心臟組織經(jīng)固定、脫水、包埋、切片、HE染色后制成玻片標(biāo)本，于熒光顯微鏡下直接觀察、并攝片，觀察小鼠心肌組織的形態(tài)學(xué)改變。
　　3.造模術(shù)后6 h經(jīng)眼球摘除采血法采集全

3、血，收集血清樣品；立即處死后留取心臟組織制成心肌勻漿提取液。運(yùn)用Lumine x xMAP技術(shù)檢測(cè)各組小鼠血清及心肌中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)，白介素-6(IL-6)，白介素-12(IL-12)，白介素-10(IL-10)，干擾素-γ(IFN-γ)的水平，觀察Pae和DPCPX對(duì)膿毒癥小鼠血清及心肌組織中的細(xì)胞因子的影響。
　　4.造模術(shù)后6 h的小鼠心臟組織，研磨成勻漿后提取上清液，Wester

4、n blot方法測(cè)定各組膿毒癥小鼠心臟組織勻漿上清液中P38。ERK。JNK的磷酸化與非磷酸化蛋白以及Bcl-2的表達(dá)水平，研究腺苷A1受體在芍藥苷抑制膿毒癥小鼠細(xì)胞因子和心肌損傷或凋亡中的保護(hù)作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.在熒光顯微鏡下可見CLP各模型組均可見心肌細(xì)胞水腫，心肌纖維排列紊亂、橫紋欠清晰；其中芍藥苷治療組小鼠心肌的病理改變較CLP模型組明顯減輕；抑制劑組、芍藥苷與抑制劑合用組小鼠的組織水腫、心肌纖維紊亂則比

5、模型組明顯加重；假手術(shù)各組小鼠則呈現(xiàn)正常組織學(xué)形態(tài)。
　　2.膿毒癥小鼠CLP組心肌組織中促炎因子TNF-α。IL-1β。IL-6。IL-12。IFN-γ及抗炎因子IL-10的濃度明顯高于Sha m各組(P<0.05)，各S ha m組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。其中，各促炎因子的CLP+DMSO+Pae組低于CLP+DMSO+ H2O組、CLP+DPCPX+H2O組高于CLP+DMSO+H2O組、CLP+DPCPX+Pae組

6、高于CLP+DMSO+Pae組(P<0.05)?？寡滓蜃覫L-10則相反。
　　3. Western blot法測(cè)定顯示，P38。ERK。JNK的磷酸化水平明顯高于Sham各組(P<0.05)。Sham組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。其中，CLP+DMSO+Pae組低于CLP+DMSO+H2O組、CLP+DPCPX+H2O組高于CLP+DMSO+ H2O組、CLP+DPCPX+Pae組高于CLP+DMSO+Pae組(P<0.05