九種?？浦参锟拐婢鞍缀屠w溶酶研究.pdf

1、四川師范大學碩士學位論文九種?？浦参锟拐婢鞍缀屠w溶酶研究姓名：趙明申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：王一丁潘映紅200505010～0121nol幾NaCl，沈脫體積8ml，流速Iml／min時，Brouin1、BrouinII、BrouinIIIⅡ8rouinⅣ的保留體積分別是4400mi、4889mi、5437mi和j725mi。BrouinII、BrouinlIIgBrouinⅣ的等電點都在pH90以上，Br

2、ouinⅣ抑制綠色木霉的最低抑菌濃度為01魄／gl。MALDITOFMS測定8rouinII、BrouinIn、Brouin【v的精確質(zhì)量分別是18798703Da、31187200Da和31178392Da。NALDI—TOFMS測定BrouinII、Brouinlll和BrouinIV的胰蛋白酶酶解片段，發(fā)現(xiàn)BrouinlII和Brouiniv有7個相似肽片段，BrouinII與BrouinIll、BrouinIV沒有相似肽片段?；?/p>

3、學方法測序結(jié)果顯示，BrouintlN端氨基酸殘基序列是eqcgsqvggktcpnnlccxkygwcgdtddh，BrouinlIIDBrouinIV的N端氨基酸殘基序列相同，均是eqcgrqaggalcpgglccxkygwcgntpey。BrouinIIN一端序列與多種植物幾丁質(zhì)酶的N。端序列有很高的相似度(Identities=66％一77％1，BrouinIII和BrouinIVN一端序列與多種植物幾丁質(zhì)酶的N一端序列的有較

4、高的相似度(Identities=43％～50％)，表明BrouinII、BrouinIII和BrouinIV與植物幾丁質(zhì)酶同源。用聚丙烯酰胺代替瓊脂糖作載體，平板電泳制膠模具代替玻璃或塑料平皿制作可控制厚度、均勻的薄層聚丙烯酰胺纖維蛋白平板，用蛋白染色指示纖維蛋白溶解情況，建立了可用于體外纖溶活性精確定量分析和纖溶藥物高通量篩選與鑒定的薄層聚丙烯酰胺纖維蛋白平板法。確定該方法的最適條件為平板膠中纖維蛋白為05mg／ml和10％丙烯酰胺

5、，37℃溫育8～12h，考馬斯亮藍染色觀察。利用薄層聚丙烯酰胺纖維蛋白平板最低可檢測出25ng蚓激酶活性；蚓激酶濃度在1101～5mg／ml時，濃度對數(shù)與其所產(chǎn)生的透明圈兩垂直直徑乘積的對數(shù)成良好的線性關系(R=09995)；重復性試驗RSD為383％(n=5)。用薄層聚丙烯酰胺纖維蛋白平板法和2種纖溶酶體外檢測中常用的發(fā)色底物法和瓊脂纖維蛋白平板法檢測蚓激酶活性，并從靈敏度、重現(xiàn)性、成本、通量、定量分析和適用范圍等6個方面進行比較。結(jié)