紫花苜蓿和白花草木樨細(xì)胞融合技術(shù)研究.pdf

1、利用原生質(zhì)融合進(jìn)行優(yōu)良基因轉(zhuǎn)移是一種短期而且非常有效的生物技術(shù)。目前國內(nèi)外利用此項(xiàng)技術(shù)對(duì)番茄、煙草、水稻等植物進(jìn)行了大量的研究。現(xiàn)已從許多種內(nèi)、種間、屬間甚至亞科間的體細(xì)胞雜交獲得雜種細(xì)胞系或雜種植株。目前細(xì)胞融合技術(shù)已被廣泛用于牧草研究的許多領(lǐng)域，并在紫花苜蓿和其他牧草抗性育種、減少膨脹病危害、提高干物質(zhì)消化率、生物可降解材料開發(fā)、生物土壤改良、生物疫苗及活性制劑等方面取得了進(jìn)展和突破。但是利用草木樨進(jìn)行原生質(zhì)體融合的研究國內(nèi)外未見報(bào)

2、道。本實(shí)驗(yàn)建立了完整的紫花苜蓿、草木樨組培體系，并對(duì)紫花苜蓿、白花草木樨原生質(zhì)體融合的條件進(jìn)行了初步分析，主要結(jié)果如下： 1.以MS為基本培養(yǎng)基，通過調(diào)整激素濃度等培養(yǎng)條件，摸索出紫花苜蓿和草木樨組織培養(yǎng)體系的最佳培養(yǎng)基。紫花紫花苜蓿的最佳培養(yǎng)基：愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)為MS+2，4-D3.0mg-L-1+6-BA0.3mg-L-1；草木樨的最佳培養(yǎng)基：愈傷誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為MS+2，4-D1.5mg-L-1+6-BA0.3 mg-

3、L-1。 2.本研究對(duì)酶液最佳配方進(jìn)行研究，得出分離紫花苜蓿原生質(zhì)體酶液的組成以2％的纖維素酶、0.2％果膠酶、0.5％離析酶為好，產(chǎn)量可達(dá)1.9×107個(gè)/g,酶解時(shí)間為10h時(shí)原生質(zhì)體的活力最大為60％；分離草木樨原生質(zhì)體的酶液組成以2％的纖維素酶、0.3％果膠酶、1％離析酶為好，產(chǎn)量可達(dá)4.31×107個(gè)/g，酶解時(shí)間控制在15h時(shí)原生質(zhì)體的火力最大為62.5％。 3.用不同濃度的IOA處理白花草木樨原生質(zhì)體，得到