白藜蘆醇對(duì)小鼠早期胚胎發(fā)育及合子基因組激活的影響.pdf

1、白藜蘆醇(Resveratrol，Res)是植物分泌的一種抗毒素，具有廣泛的藥理和生物活性。研究表明，白藜蘆醇可促進(jìn)卵母細(xì)胞體外成熟和胚胎體外發(fā)育，但對(duì)其作用機(jī)制尚未清楚，特別是對(duì)Res在胚胎發(fā)育阻滯中的作用機(jī)制還未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬通過(guò)，探討白藜蘆醇對(duì)昆白小鼠早期胚胎發(fā)育和合子基因組激活(ZGA)的影響，以便深入了解胚胎發(fā)育阻滯與活性氧之間的關(guān)系，為認(rèn)識(shí)胚胎的早期發(fā)生機(jī)理奠定基礎(chǔ)。具體研究結(jié)果如下。
　　1、探討了白藜蘆醇對(duì)小鼠早

2、期胚胎體外發(fā)育的影響。為篩選得到白藜蘆醇對(duì)小鼠胚胎處理的適宜作用濃度及作用時(shí)間，添加不同濃度Res到體外培養(yǎng)的小鼠胚胎培養(yǎng)液中，觀察其作用效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2μmol/L處理組的4-細(xì)胞發(fā)育率(68.75％)、囊胚發(fā)育率(49.22％)和囊胚細(xì)胞數(shù)(51.40)顯著高于對(duì)照組（58.29％、41.21％和44.27，p＜0.05），4μmol/L組和5μmol/L組的4-細(xì)胞發(fā)育率（64.17％和61.83％）和囊胚發(fā)育率(45％和42.

3、62％)與對(duì)照組無(wú)顯著差異(p＞0.05)，但10μmol/L組的4-細(xì)胞率和囊胚率(36.52％，18.26％)顯著低于對(duì)照組(p＜0.05)。囊胚細(xì)胞凋亡數(shù)、凋亡相關(guān)基因和發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加2μmol/L的Res可顯著上調(diào)Bcl-2及Oct4、cdx2和Nanog基因表達(dá)(p＜0.05)，顯著下調(diào)Bax、p53基因表達(dá)(p＜0.05)，但對(duì)Casepase3基因表達(dá)和囊胚細(xì)胞凋亡數(shù)(1.14vs1.57)沒(méi)有影響(

4、p＞0.05)。不同時(shí)間段添加Res的試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Res發(fā)揮作用時(shí)間主要是在胚胎培養(yǎng)的第二天，即2-細(xì)胞至4-細(xì)胞階段。
　　2、分析了Res對(duì)體外培養(yǎng)小鼠胚胎活性氧水平的影響。不同階段小鼠胚胎的ROS水平檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2μmol/L和4μmol/L Res組的2-細(xì)胞、4-細(xì)胞胚胎和囊胚ROS水平對(duì)對(duì)照組無(wú)顯著差異(26.84 vs26.00，25.8;33.56 vs32.79，30.71;15.79 vs17.10，17.

5、55，p＞0.05)，體內(nèi)發(fā)育的2-細(xì)胞、4-細(xì)胞期胚胎活性氧水平顯著高于體外培養(yǎng)對(duì)照組(39.62 vs26.00，44.53vs32.79，p＜0.05)。為進(jìn)一步了解Res的抗氧化作用，檢測(cè)了抗氧化相關(guān)基因GPX1、Mn-SOD、PRDX3、GLS2表達(dá)，并進(jìn)行了低氧培養(yǎng)試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加2μmol/L和4μmol/L Res能顯著提高以上基因的表達(dá)，在低氧培養(yǎng)條件(5％O2)下Res不能提高胚胎的囊胚率(41.07％ vs39

6、.07％，p＞0.05)。
　　3、初步研究了Res促進(jìn)小鼠胚胎越過(guò)2-細(xì)胞阻滯的作用機(jī)制。qRT-PCR法檢測(cè)合子基因組激活(ZGA)相關(guān)基因表達(dá)情況的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2μmol/L的Res可顯著提高2-細(xì)胞至4-細(xì)胞胚胎Hsp70.1、Zscan4d、MuERV、TRC、ND-1、ATP6、ATP8及Oct4基因表達(dá)(p＜0.05)和胚胎的膜電位(p＜0.05)顯著降低Sox2基因表達(dá)(p＜0.05)，但不影響2-細(xì)胞期胚胎線粒體的