汗法調節(jié)腸道微生態(tài)治療慢性腎臟病的研究.pdf

1、目的：
　　觀察不同劑量麻黃湯對大鼠慢性腎臟病(CKD)的治療作用及機制。
　　方法：
　　采用隨機數字表法，將80只大鼠分為正常組、模型組、阿托品組、毛果蕓香堿組、纈沙坦組、麻黃湯高劑量組、麻黃湯中劑量組、麻黃湯低劑量組。正常大鼠予以生理鹽水一次性尾靜脈注射，其余大鼠一次性尾靜脈注射阿霉素（4mg/kg），然后正常組再予以生理鹽水灌胃，其余大鼠腺嘌呤灌胃（200mg/kg/d）連續(xù)灌胃建立慢性腎臟疾病大鼠模型。建模成

2、功后，正常和模型大鼠予以同等劑量生理鹽水灌胃。建模成功后，毛果蕓香堿組予以毛果蕓香堿5mg/kg/d灌胃，阿托品組予以阿托品0.1mg/kg/d腹腔注射，纈沙坦組予以纈沙坦13mg/kg/d灌胃，麻黃湯高劑量組予以麻黃湯1.2g/kg/d灌胃，麻黃湯中劑量組予以麻黃湯0.6g/kg/d灌胃，麻黃湯低劑量組予以麻黃湯0.3 g/kg/d灌胃。藥物干預4周后收集血、尿、腳掌皮膚、腎臟、腸道等組織標本，用于檢測腎功能情況，病理染色觀察腎臟、腸

3、道、汗腺的形態(tài)變化以及酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測血清中白介素-6（IL-6)和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量，蛋白質印跡（WB）檢測腎臟組織轉化生長因子（TGF-β）和核因子-κB(NF-κB)表達。
　　結果：
　?。?）汗腺的改變：正常汗腺未見明顯改變，模型亦未見明顯改變，與模型比較，使用了麻黃湯高、中、低劑量及毛果蕓香堿大鼠汗腺明顯擴張，阿托品大鼠汗腺明顯收縮，纈沙坦未見明顯改變。
　?。?）腎臟結構與功能的變化：

4、與正常大鼠比較，模型24h尿蛋白定量，血肌酐，尿素氮均明顯升高（P＜0.05）。加用藥物后，麻黃湯高、中、低劑量各項指標均降低，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而毛果蕓香堿、阿托品各項指標改變不明顯，纈沙坦干預大鼠24h尿蛋白明顯降低（P＜0.05），血肌酐、尿素氮未見明顯改變。Masson染色及HE染色均提示：與正常比較，模型腎小球明顯硬化、固縮，小管擴張明顯，炎癥細胞大量浸潤，大面積膠原纖維染色明顯。模型腎臟組織病理評分及腎間質纖維

5、化面積與正常比較均明顯升高（P＜0.05）。與模型比較，麻黃湯高、中、低劑量病理評分和纖維化面積均有改善（P＜0.05）。毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦病理改變及纖維化面積與模型比較無明顯差異。Western-blot檢測 TGF-β及 NF-κB均提示：正常幾乎不表達，模型與正常比較，表達明顯增多（P＜0.05）。與模型比較，麻黃湯高、中、低劑量TGF-β及NF-κB表達均下降，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦與

6、模型比較改變不明顯。
　　（3）腸粘膜屏障結構：與正常比較，模型腸道絨毛倒伏，刷狀緣不連續(xù)，上皮糜爛脫落，腸粘膜固有層大量炎性細胞侵潤，出現(xiàn)固有層水腫。模型腸粘膜病理評分與正常比較明顯升高。麻黃湯高、中、低劑量腸粘膜病理評分與模型比較均有不同程度的降低（P＜0.05）。毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦腸粘膜病理評分未見明顯改變。
　　（4）系統(tǒng)炎癥與腸道局部免疫：模型血清IL-6、TNF-α與正常比較均明顯升高（P＜0.05）。與

7、模型比較，麻黃湯高、中、低劑量的IL-6、TNF-α均有明顯降低（P＜0.05），毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦與模型比較未見明顯改變。免疫組化結果顯示，模型大鼠腸粘膜與正常比較，CD4+T淋巴細胞表達明顯減低，而CD8+T淋巴細胞表達則增加明顯（P＜0.05）。麻黃湯高、中、低劑量與模型相比，CD4+T淋巴細胞表達增加，而CD8+T淋巴細胞表達則明顯減少（P＜0.05）。毛果蕓香堿、阿托品、纈沙坦的CD4+T淋巴細胞及CD8+T淋巴細胞表