硼替佐米聯合地西他濱對多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226作用的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:觀察硼替佐米(BTZ)單藥或聯合地西他濱(DAC)在體外對多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226增殖、凋亡、細胞周期的影響,探討兩藥聯合的可能效應。倒置相差顯微鏡成像觀察細胞增殖與凋亡。
  方法:多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226以BTZ5nmol/L(5nM)、10nmol/L(10nM)、20nmol/L(20nM)單藥或聯合DAC0.5mmol/L(0.5mM)處理48小時后,采用倒置相差顯微鏡成像技術觀察各處理組的細胞

2、狀態(tài);CCK-8(cell counting kit-8)法檢測細胞活率和增殖抑制率;Annexin-V/PI雙染法檢測細胞凋亡的變化;流式細胞儀檢測細胞周期的變化;蛋白質印跡法(Western blot)檢測凋亡相關蛋白caspase-3、caspase-9、PARP-1的表達。
  結果:
  (1)倒置相差顯微鏡下觀察發(fā)現:與 DMSO對照組相比,BTZ單藥組及DAC單藥組中細胞密度降低,出現細胞碎片。當BTZ聯合DA

3、C時,這些變化更加顯著;
  (2)在BTZ單藥處理組中,隨著BTZ濃度增加,細胞活率逐漸降低(p<0.05),相同BTZ濃度下,DAC+BTZ組活率明顯減少。BTZ對骨髓瘤細胞的增殖抑制作用與劑量正相關,與 BTZ單藥組相比,DAC和 BTZ聯合組對骨髓瘤細胞的增殖抑制作用更為顯著(p<0.05),采用金式公式計算協同指數:不同濃度BTZ(5nM、10nM、20nM)聯合DAC時的q值分別為1.54、1.23、1.06,根據金式

4、公式的判斷標準BTZ(5nM、10nM)與DAC聯合有協同作用,BTZ(20nM組)與DAC有相加作用;
  (3) Annexin-V/PI雙染法檢測細胞凋亡證實BTZ及DAC單藥可誘導RPMI8226發(fā)生凋亡。其中隨著BTZ的濃度增加,凋亡細胞比率增加,差異明顯(p<0.05)。相比于單藥組,DAC+BTZ合用組凋亡細胞比率增高,具有統(tǒng)計學差異(p<0.05);
  (4)細胞周期檢測顯示:與DMSO對照組相比,BTZ單

5、藥處理組中,隨著BTZ濃度增加,G0-G1期細胞比率遞增,S期、G2-M期細胞比率遞減(p<0.05);與BTZ單藥及DAC單藥組相比,DAC+BTZ聯合組對RPMI8226的G0-G1期阻滯作用更加顯著(p<0.05)。
 ?。?) Western blot方法檢測凋亡相關蛋白顯示:BTZ在48 h可以導致RPMI8226細胞內的PARP-1發(fā)生剪切,同時caspase-3和caspase-9的剪切激活片段也同樣增加,當BTZ與

6、DAC聯用時,細胞內PAPR-1的剪切以及caspase-3、caspase-9的剪切活化也更加的明顯。
  結論:
  (1)BTZ對RPMI8226細胞有明顯的增殖抑制,促進凋亡和G0-G1周期阻滯作用,并且與BTZ濃度呈正相關,DAC對RPMI8226細胞也有明顯的增殖抑制,促進凋亡和G0-G1周期阻滯作用,
  (2)兩藥合加在BTZ不同濃度有不同的相互作用,在低濃度5nM和中濃度10nM時有協同作用,在高濃度

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