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1、研究背景:許多臨床現(xiàn)象顯示,機(jī)械應(yīng)激是影響機(jī)體修復(fù)的重要因素,減輕機(jī)械應(yīng)激可以減輕修復(fù)的程度。在臨床工作中發(fā)現(xiàn),瘢痕的形成和機(jī)械應(yīng)激密切相關(guān),無(wú)機(jī)械應(yīng)激的手術(shù)切口瘢痕增生不明顯,骨折端的輕微機(jī)械應(yīng)激導(dǎo)致骨痂大量增生,即過(guò)度的修復(fù),無(wú)機(jī)械應(yīng)激可以獲得一期愈合,沒(méi)有骨痂形成等等,上述事實(shí)都說(shuō)明機(jī)械應(yīng)激是影響組織修復(fù)的重要因素。并且很多相關(guān)的基礎(chǔ)研究也證實(shí)此理論,此理論能否在血管上得到證實(shí),血流動(dòng)力學(xué)的改變是否能夠?qū)е卵鼙诮Y(jié)構(gòu)的重構(gòu)?本課題
2、組的前期工作中發(fā)現(xiàn):1、噴涂a-氰基丙烯酸酯粘合劑均勻包被血管能夠達(dá)到固定血管吻合口的目的。2、噴涂粘合劑血管吻合口的狹窄率較低。眾多文獻(xiàn)報(bào)道靜脈血管移植到動(dòng)脈后,靜脈血管管壁出現(xiàn)了動(dòng)脈化的改變。除營(yíng)養(yǎng)改變外,血流動(dòng)力學(xué)改變應(yīng)該是導(dǎo)致管壁發(fā)生變化的主要因素。另外當(dāng)前相關(guān)研究大多集中于臨床較為常見(jiàn)的靜脈移到動(dòng)脈后血流動(dòng)力學(xué)變化引起血管狹窄機(jī)制的研究,但對(duì)于其它血流動(dòng)力學(xué)變化調(diào)控血管重構(gòu)機(jī)制研究較少,本研究以動(dòng)靜脈移植和動(dòng)靜脈瘺兩種模型為對(duì)
3、象,對(duì)血流動(dòng)力學(xué)變化調(diào)控血管重構(gòu)機(jī)制進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)研究。
目的:為了進(jìn)一步完善血流動(dòng)力學(xué)變化調(diào)控血管重構(gòu)機(jī)制理論,并對(duì)骨骼肌肉系統(tǒng)出現(xiàn)的“機(jī)械應(yīng)激促進(jìn)增生,減輕機(jī)械應(yīng)激抑制增生”現(xiàn)象,是否也適用于血流動(dòng)力學(xué)變化調(diào)控血管重構(gòu)進(jìn)行驗(yàn)證。我們選擇了當(dāng)前研究較少的兩種模型進(jìn)行相關(guān)理論初步實(shí)驗(yàn)研究,以動(dòng)靜脈移植和動(dòng)靜脈瘺兩種模型為對(duì)象,對(duì)血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行測(cè)量,對(duì)血管重構(gòu)中大體、組織、細(xì)胞及分子生物水平進(jìn)行觀察研究,并對(duì)兩要素之間關(guān)系進(jìn)行
4、分析。
方法:
(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及血管部位的選擇,比格犬和SD大鼠各5只,分別測(cè)量?jī)蓚?cè)頸總動(dòng)脈和頸靜脈以及股動(dòng)靜脈的外徑和便于操作有效長(zhǎng)度,分析比較適合模型建立的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和血管。
(2)動(dòng)靜脈移植模型建立,血流動(dòng)力學(xué)變化調(diào)控血管重構(gòu)機(jī)制研究。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為比格犬12只,12-15kg。1將犬左側(cè)頸總動(dòng)脈1cm切斷移植到右側(cè)頸外靜脈,結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈,右側(cè)頸總動(dòng)脈為對(duì)照。分別于術(shù)后1,2,4周對(duì)兩組血管進(jìn)行大體觀察
5、;HE染色,病理組織學(xué)觀測(cè)內(nèi)膜增生厚度;EVG染色,組織病理學(xué)觀測(cè)彈性纖維和膠原纖維含量變化;免疫組化染色觀測(cè)增值細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá);TUNEL技術(shù)觀測(cè)調(diào)亡細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá);RT-PCR技術(shù)觀測(cè)MMP2,9和eNOS基因表達(dá)。
(3)動(dòng)靜脈瘺模型建立,血流動(dòng)力學(xué)變化調(diào)控血管重構(gòu)機(jī)制研究。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為比格犬12只,12-15kg。1將犬左側(cè)頸總動(dòng)脈和頸外靜脈傳統(tǒng)針線吻合,右側(cè)頸總動(dòng)脈和頸外靜脈為對(duì)照。分別于術(shù)后1,2,4周對(duì)兩組血管進(jìn)行大體
6、觀察;HE染色,病理組織學(xué)觀測(cè)內(nèi)膜增生厚度;EVG染色,組織病理學(xué)觀測(cè)彈性纖維和膠原纖維含量變化;免疫組化染色觀測(cè)增值細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá);TUNEL技術(shù)觀測(cè)調(diào)亡細(xì)胞表達(dá);RT-PCR技術(shù)觀測(cè)MMP2,9和eNOS基因表達(dá)。
結(jié)果:
(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比格犬較SD大鼠頸部血管更有利于手術(shù)操作,比格犬更易測(cè)量血流動(dòng)力學(xué)變化情況,比格犬血壓和人更加接近。
(2)動(dòng)脈移植到靜脈后,血流速度和血壓明顯減小;HE染色觀測(cè)到內(nèi)膜厚
7、度減小;EVG染色觀測(cè)到膠原纖維含量明顯減少,彈性纖維含量變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;免疫組化染色,觀測(cè)到PCNA指數(shù)無(wú)明顯變化;凋亡染色,觀測(cè)到凋亡細(xì)胞明顯增加,凋亡指數(shù)增大;電鏡觀察,中膜平滑肌細(xì)胞減少;RT-PCR觀測(cè)到MMP2,9和eNOS均出現(xiàn)基因表達(dá)增加。
(3)動(dòng)靜脈瘺術(shù)后,靜脈和動(dòng)脈段血流速度增加,靜脈血壓上升,動(dòng)脈血壓小幅度降低;HE染色,測(cè)量動(dòng)脈段內(nèi)膜厚度增加,靜脈段內(nèi)膜厚度增加明顯;EVG染色觀測(cè)到動(dòng)脈段膠原纖維含
8、量增加,靜脈段膠原纖維含量明顯增加,彈性纖維含量變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;免疫組化染色行觀測(cè)計(jì)算,動(dòng)脈段PCNA指數(shù)增大,靜脈段PCNA指數(shù)明顯增大;凋亡染色后觀測(cè)到動(dòng)脈段和靜脈段凋亡細(xì)胞無(wú)明顯增加,凋亡指數(shù)無(wú)明顯增大;電鏡觀察,動(dòng)脈段內(nèi)膜和中膜平滑肌細(xì)胞增多,靜脈段內(nèi)膜和中膜平滑肌細(xì)胞明顯增加;RT-PCR觀測(cè)到動(dòng)脈段MMP2,9和eNOS表達(dá)減少,靜脈段MMP2,9和eNOS表達(dá)明顯減少。
結(jié)論:通過(guò)建立動(dòng)靜脈移植模型和動(dòng)靜脈瘺模
9、型,從血流動(dòng)力學(xué)變化調(diào)控血管重構(gòu)機(jī)制角度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,進(jìn)一步完善相關(guān)理論。血流動(dòng)力學(xué)改變后,機(jī)械應(yīng)力信號(hào)傳導(dǎo)到血管壁細(xì)胞,酶(MMP2,9和eNOS等)及細(xì)胞因子的表達(dá)出現(xiàn)變化,血管壁細(xì)胞增殖凋亡及遷移機(jī)制改變,細(xì)胞外基質(zhì)(膠原纖維和彈性纖維等)代謝機(jī)制改變,表現(xiàn)出血管壁結(jié)構(gòu)的變化。進(jìn)一步證明血流動(dòng)力學(xué)變化對(duì)血管重構(gòu)的調(diào)控作用,并且血流動(dòng)力學(xué)改變程度不同,血管重構(gòu)出現(xiàn)明顯不同變化。同時(shí)“機(jī)械應(yīng)激促進(jìn)增生,減輕機(jī)械應(yīng)激抑制增生”理論假設(shè)在
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